CN106106173A - 一种双相组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种双相组织培养方法,包括以下步骤:(1)选无病虫害的植株,取枝条中部的茎干;(2)步骤(1)所得茎干在流水里冲洗后,消毒灭菌,待接种;(3)双相培养基配制:下层为固体培养基,上层为液体培养;下层采用1/2MS+2‑iP4mg/L+IBA1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,上层不加琼脂,其他成分和下层一样;配制时先配制下层,在下层凝固时,将配制好的上层液体培养基在无菌条件下倒入培养瓶中;(4)培养条件:将步骤(2)所得茎干接种于培养瓶内,在环境温度20℃下,光照4000lx、每天16小时光照条件下进行培养。相对于现有技术,本发明方法可以显著缩短组培时间,提高发芽率和增殖率,有效扩大繁殖系数,并且可持续性增强。
Description
技术领域
本发明涉及一种双相组织培养方法,属于植物组织培养技术领域。
背景技术
组织培养法是现在最基本的快速扩繁方法,可以在短时间内生产出几十万或几百万株苗木。但现有的方法培养基基本上是单层的,植株吸收的养分或激素也只能是单一层面上的,并且扩繁系数低,增殖率不高,可持续性不强。
目前,现有技术中也有双相组织培养方法的研究,但是仍然存在一定缺陷,如生根效果不够理想,增殖率差,并且工艺复杂,需要单层加双相多步骤培养,时间长,成本高。
发明内容
发明目的:为了克服现有技术中存在的不足,本发明提供了一种双相组织培养方法。
技术方案:为实现上述目的,本发明提供了一种双相组织培养方法,包括以下步骤:
(1)在晴天选无病虫害的植株,取枝条中部的茎干,每段茎干带一个芽,节上下各留1cm,洗净灰尘,再用自来水冲洗;
(2)步骤(1)所得茎干在流水里冲洗后,再用70%酒精浸泡30s,用无菌水洗,然后用0.1%的升汞灭菌6min,再用无菌水洗,待接种;
(3)双相培养基配制:下层为固体培养基,上层为液体培养;下层采用1/2MS+2-iP(2-异戊烯腺嘌呤)4mg/L+IBA(吲哚丁酸)1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,上层不加琼脂,其他成分和下层一样;配制时先配制下层,在下层凝固时,将配制好的上层液体培养基在无菌条件下倒入培养瓶中;
(4)培养条件:将步骤(2)所得茎干接种于培养瓶内,在环境温度20℃下,光照4000lx、每天16小时光照条件下进行培养。
作为优选,步骤(1)中所述植株为四季杜鹃、月季、微型月季、八仙花、蓝莓等。
作为另一种优选,步骤(2)中所述各无菌水洗的次数为3次。
作为另一种优选,步骤(2)中所述流水里冲洗的时间为30min。
作为另一种优选,步骤(3)中所述上层液体培养基的高度小于等于1cm。
作为另一种优选,步骤(3)中所述培养瓶为玻璃管状的培养瓶。
本发明双相组培法是将培养基分上下两层,下层是固态培养基,上层是液态培养基,外殖体在下层有琼脂的培养基中,芽的分化较少,生长速度较慢,茎叶展开来后生伸长较缓,此时在上层的液体培养基中,新的腋芽发生,并接连依次分化;两层培养基里的成分可以进行调节,从而最大限度的提高植物的增殖率。有效扩大繁殖系数,使规模化、工厂化生产更加容易。此外,本发明方法只进行双相培养步骤,工序简单,节约时间。
技术效果:相对于现有技术,本发明方法具有以下优势:
1、缩短组培时间,使原来组培要一年出苗的可以6个月即可发根出苗;
2、在单层培养基基础上增殖率提高约12倍以上;
3、技术难度和以前一样,不会变得更复杂;
4、使组培可持续性增强,不用在外殖体没长到一定程度就换培养基。
附图说明
图1:本发明双相培养基示意图;
图2:本发明双相培养四季杜鹃生长情况;
图3:常规单层培养四季杜鹃生长情况。
具体实施方式
根据下述实施例,可以更好地理解本发明。而本领域的技术人员容易理解,实施例所描述的具体试验结果仅用于说明本发明,而不应当也不会限制权利要求书中所描述的本发明。
实施例1
以四季杜鹃为例:
1、在晴天选无病虫害的植株,取枝条中部的茎干,每段茎干带一个芽,节上下各留1cm,用洗洁净洗净灰尘,再用自来水冲洗3次;
2、茎干在流水里冲洗30min后,再用70%酒精浸泡30s,再用无菌水洗3次,用0.1%的升汞灭菌6min,再用无菌水洗3次,待接种;
3、双相培养基配制:芽增殖培养基:下层采用1/2MS+2-iP 4mg/L+IBA 1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,上层不加琼脂,其中激素、糖成分和下层一样;配制时先配制下层,下层和一般培养基一样方法配制,在下层凝固时,将配制好的液态培养基在无菌条件下倒入培养瓶中,上层的量不可过多,一般不超过1cm高。
4、培养条件:在环境温度20℃下,光照4000lx、每天16小时光照条件下进行培养。实施例2
与实施例1基本相同,不同之处采用的植株为月季植株。
实施例3
与实施例1基本相同,不同之处采用的植株为微型月季植株。
实施例4
与实施例1基本相同,不同之处采用的植株为八仙花植株。
实施例5
与实施例1基本相同,不同之处采用的植株为蓝莓植株植株。
实验例
按照本发明上述方法进行组织培养,在25d和60d时观察,对培养基的状况和茎叶的生长表现,观察培养过程中持续性的影响。
考察结果见下表1和表2。
单层培养为按照本发明实施例1方法,培养基为仅有所述下层固体培养基的单层培养基;
对照1组为按照本发明实施例1方法,不同之处为培养基中去掉2-iP;
对照1组为按照本发明实施例1方法,不同之处为培养基中去掉IBA;
表1各方法培养60d后发芽情况
组别 | 发芽率(%) | 未发芽率(%) | 死亡污染率(%) |
单层培养 | 53.3 | 33.3 | 13.3 |
对照1组 | 51.7 | 23.3 | 25.0 |
对照2组 | 55.0 | 25.0 | 20.0 |
实施例1 | 85.0 | 11.7 | 3.3 |
实施例2 | 86.7 | 10.0 | 3.3 |
实施例3 | 85.0 | 13.3 | 1.7 |
由表1可见,与单层培养方法以及两个对照组相比较,本发明组织培养方法,能够显著提高植株的发芽率,降低未发芽率和死亡污染率。
表2各方法培养过程中状况观察
由上表2结果可得,单层培养基易干脱水,造成培养基和瓶壁容易脱离,所以一定时期后就要转到新培养基里继续让其生长,这样就会使外殖体增加受污染的机会,从而影响组培效率;而双相培养基由于上层是液态培养基,解决了单层培养基所带来的问题,使得组培变得更有可持续性。
Claims (6)
1.一种双相组织培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)在晴天选无病虫害的植株,取枝条中部的茎干,每段茎干带一个芽,节上下各留1cm,洗净灰尘,再用自来水冲洗;
(2)步骤(1)所得茎干在流水里冲洗后,再用70%酒精浸泡30s,用无菌水洗,然后用0.1%的升汞灭菌6min,再用无菌水洗,待接种;
(3)双相培养基配制:下层为固相培养基,上层为液相培养基;下层采用1/2MS+2-iP4mg/L+IBA 1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,上层不加琼脂,其他成分和下层一样;配制时先配制下层,在下层凝固时,将配制好的上层液体培养基在无菌条件下倒入培养瓶中;
(4)培养条件:将步骤(2)所得茎干接种于培养瓶内,在环境温度20℃下,光照4000lx、每天16小时光照条件下进行培养。
2.根据权利要求1所述的双相组织培养方法,其特征在于,步骤(1)中所述植株为四季杜鹃、月季、微型月季、八仙花或蓝莓。
3.根据权利要求1所述的双相组织培养方法,其特征在于,步骤(2)中所述各无菌水洗的次数为3次。
4.根据权利要求1所述的双相组织培养方法,其特征在于,步骤(2)中所述流水里冲洗的时间为30min。
5.根据权利要求1所述的双相组织培养方法,其特征在于,步骤(3)中所述上层液体培养基的高度小于等于1cm。
6.根据权利要求1所述的双相组织培养方法,其特征在于,步骤(3)中所述培养瓶为玻璃管状的培养瓶。
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