CN105218601A - 从柿子中提取单宁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从柿子中提取单宁的方法，包括以下步骤：1)将柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，将提取液过滤，取滤液备用；2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，放置过夜，离心，取上清液；3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，过滤，取滤液通过截留分子量为400～500的中空纤维膜，收集截留液备用；5)将截留液通过截留分子量为13000～15000的中空纤维膜，收集透过液，干燥，即为柿子单宁粉末。本发明提取的柿子单宁具有很好的抑制变形链球菌的作用，可用于防龋齿。
Description
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种从柿子中提取单宁的方法。
背景技术
柿子(PersimmonDiospryroskakiL)果肉中含量丰富的单宁类物质。研究表明，柿子单宁具有很强的抗氧化性以及和蛋白质结合能力，具有抑制人淋巴细胞白血病、降血压、清除体内自由基以及明显抑制蝮蛇、眼镜蛇、五步蛇毒液中多种酶类以及毒素的活性。虽然也有报道称柿子提取物，有效成分为黄酮、三萜类和可水解单宁，对枯草芽孢杆菌表现出了一定的耐药性，但耐药性并不稳定。目前并未见到柿子单宁可用于抑制变形链球菌的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从柿子中提取单宁的方法，提取的柿子单宁可有效抑制变形链球菌，具有很好的防龋齿效果。
本发明提供的技术方案是从柿子中提取单宁的方法，包括以下步骤：
1)将柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，将提取液过滤，取滤液备用；
2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，放置过夜，离心，取上清液；
3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，过滤，取滤液通过截留分子量为400～500的中空纤维膜，收集截留液备用；
5)将截留液通过截留分子量为13000～15000的中空纤维膜，收集透过液，干燥，即为柿子单宁粉末。
步骤1)中，乙醇的体积浓度为70～80％，其加入量为柿子重量的10～20倍，在60～80℃下提取1～3次，每次1～3h。
步骤2)中，乙醇的加入量为浓缩液的2～4倍。
步骤3)中，水的加入量为浸膏重量的3～5倍。
本发明提取得到的柿子单宁具有很好的抑制变形链球菌的效果，可用于防龋齿。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
实施例1
1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的10倍的70v％乙醇，在60℃下提取1h，合并提取液，过滤，取滤液备用；
2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的2倍,放置过夜，离心，取上清液；
3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，水的加入量为浸膏重量的3倍,过滤，取滤液通过截留分子量为400～500的中空纤维膜，收集截留液备用；
5)将截留液通过截留分子量为13000～15000的中空纤维膜，收集透过液，真空冷冻干燥，即为柿子单宁粉末。
实施例2
1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的20倍的80v％乙醇，在80℃下提取3次，每次3h，合并提取液，过滤，取滤液备用；
2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的4倍,放置过夜，离心，取上清液；
3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，水的加入量为浸膏重量的5倍,过滤，取滤液通过截留分子量为400～500的中空纤维膜，收集截留液备用；
5)将截留液通过截留分子量为13000～15000的中空纤维膜，收集透过液，真空冷冻干燥，即为柿子单宁粉末。
实施例3
1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v％乙醇，在70℃下提取2次，每次2h，合并提取液，过滤，取滤液备用；
2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的3倍,放置过夜，离心，取上清液；
3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，水的加入量为浸膏重量的4倍,过滤，取滤液通过截留分子量为400～500的中空纤维膜，收集截留液备用；
5)将截留液通过截留分子量为13000～15000的中空纤维膜，收集透过液，真空冷冻干燥，即为柿子单宁粉末。
对照实施例1
1)将柿子去皮，破碎，加入柿子重量的15倍的75v％乙醇，在70℃下提取2次，每次2h，合并提取液，过滤，取滤液备用；
2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，乙醇的加入量为浓缩液的3倍,放置过夜，离心，取上清液；
3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，真空冷冻干燥，即为柿子单宁粉末。
实验例(体外抑菌试验)
1、实验方法：
1)分别取实施例1～3以及对照实施例1的柿子单宁粉末1g粉碎后加10ml无菌水配成混合溶液。
2)抑菌片的制备：取无菌并干燥的滤纸片4片，每片分别滴加实施例1～3以及对照实施例1制成的混合溶液20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平面皿内，开盖置温箱(37℃)中烤干，或置室温下自然干燥后备用。阴性对照组抑菌片的制备：取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水20μl，干燥后备用。
3)接种变形链球菌：用无菌棉拭子蘸取浓度为5×105～5×106cfu/ml变形链球菌菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次，每涂抹一次，平板转动60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周，盖好平皿，置室温干燥5min。
4)抑菌片贴放：每次贴放一个染菌平板，每个平板贴放实施例以及对照实施例的4片抑菌片和1片阴性对照组抑菌片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面，各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面，盖好平皿，置于37℃温箱内培养16～18h，用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录，实验重复三次。
2、实验结果
| 抑菌圈(mm) | |
| 实施例1 | 16.1 |
| 实施例2 | 16.6 |
| 实施例3 | 16.3 |
| 对照实施例1 | 6.7 |
| 阴性对照组 | 3.8 |
Claims (4)
1.从柿子中提取单宁的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将柿子去皮，破碎，加入乙醇提取，将提取液过滤，取滤液备用；
2)将滤液浓缩，加入95v％乙醇，放置过夜，离心，取上清液；
3)将上清液过AB-8大孔树脂，先用水洗柱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；
4)将乙醇洗脱液浓缩回收溶剂，得到浸膏，加水溶解，过滤，取滤液通过截留分子量为400～500的中空纤维膜，收集截留液备用；
5)将截留液通过截留分子量为13000～15000的中空纤维膜，收集透过液，干燥，即为柿子单宁粉末。
2.根据权利要求1所述的从柿子中提取单宁的方法，其特征在于：步骤1)中，乙醇的体积浓度为70～80％，其加入量为柿子重量的10～20倍，在60～80℃下提取1～3次，每次1～3h。
3.根据权利要求1所述的从柿子中提取单宁的方法，其特征在于：步骤2)中，乙醇的加入量为浓缩液的2～4倍。
4.根据权利要求1所述的从柿子中提取单宁的方法，其特征在于：步骤3)中，水的加入量为浸膏重量的3～5倍。
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