CN104587398A

CN104587398A - 一种中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用

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Publication number: CN104587398A
Application number: CN201510027961.6A
Authority: CN
Inventors: 李兴尧; 李业明
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-01-20
Filing date: 2015-01-20
Publication date: 2015-05-06

Abstract

本发明涉及发酵微生物中药制剂领域，具体来说是一种预防或治疗高血压、脑动脉硬化、脑萎缩、脑血栓、脑梗塞及其后遗症的药物；所述后遗症指偏瘫(半身不遂)、四肢麻木、语言障碍、头痛、头晕、眼花、耳鸣、失眠、反应迟钝、应激差、记忆力减退等。该制剂是将侧耳发酵物与按重量份数计：水蛭5-10份，地龙20-30份，川芎10-20份，三七5-10份，天麻3-10份，冰片1-8份，白芷20-30份，僵蚕10-20份，黄芪20-30份，银杏5-15份，全蝎3-10份，郁金10-20份，人参10-20份，黄芩10-20份，丹参15-30份，羌活10-20份，葛根30-40份，何首乌20-50份，红花10-20份，安息香15-30份，人工麝香0.1-5份的中药原料药混合所得。该制剂具有活血化瘀、温经通络、消肿降压、镇静安神、扶正固本中和调理的作用，能够有效降低预后复发率。

Description

一种中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及发中药微生物发酵制剂，具体来说是一种中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用。

背景技术

脑血栓形成是脑梗死最常见的类型。是脑动脉主干或皮质支动脉粥样硬化导致血管增厚、管腔狭窄闭塞和血栓形成，引起脑局部血流减少或供血中断，脑组织缺血缺氧导致软化坏死出现局灶性神经***症状；该疾病随年龄增长病死率明显上升，平均病死率为25％左右，常见死因是脑疝、多脏器衰竭、继发感染及心肺功能不全幸存者中病残率亦较高，大约20％的幸存者在1～2年内再次复发。

目前西医临床上防治脑血栓的方法主要是急性期内溶栓抗凝抗水肿治疗，所用药物副作用大且复发率高，中医临床使用的药物同样存在上述缺点。

发明内容

本发明针对上述问题，提供一种副作用小、利用率高、不易复发的中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用，可以有效预防和治疗高血压、脑动脉硬化、脑萎缩、脑血栓及其后遗症。

为实现上述目的，本发明提供了一种中药微生物发酵制剂：将侧耳发酵物与中药原料药混合所得，所述中药原料药按重量份数计：水蛭5-10份，地龙20-30份，川芎10-20份，三七5-10份，天麻3-10份，冰片1-8份，白芷20-30份，僵蚕10-20份，黄芪20-30份，银杏5-15份，全蝎3-10份，郁金10-20份，人参10-20份，黄芩10-20份，丹参15-30份，羌活10-20份，葛根30-40份，何首乌20-50份，红花10-20份，安息香15-30份，人工麝香0.1-5份；所述中药原料药按重量计：水蛭5-10g，地龙20-30g，川芎10-20g，三七5-10g，天麻3-10g，冰片1-8g，白芷20-30g，僵蚕10-20g，黄芪20-30g，银杏5-15g，全蝎3-10g，郁金10-20g，人参10-20g，黄芩10-20g，丹参15-30g，羌活10-20g，葛根30-40g，何首乌20-50g，红花10-20g，安息香15-30g，人工麝香0.1-5g；侧耳发酵物占中药原料药质量的10-30％；

所述侧耳为Pleurotus sp.，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060。

本发明所采用的技术方案为：

(1)按重量份数计，将水蛭5-10份，地龙20-30份，川芎10-20份，三七5-10份，天麻3-10份，冰片1-8份，白芷20-30份，僵蚕10-20份，黄芪20-30份，银杏5-15份，全蝎3-10份，郁金10-20份，人参10-20份，黄芩10-20份，丹参15-30份，羌活10-20份，葛根30-40份，何首乌20-50份，红花10-20份，安息香15-30份，人工麝香0.1-5份的中药原料药混合，待用；

(2)将侧耳接种到茯苓、天竺黄、六神曲、平菇、马勃、木耳、银耳中的一种或二种以上中发酵，得到侧耳发酵物，待用；

(3)取步骤(1)的中药原料药与步骤(2)所得侧耳发酵物混合后即得到中药微生物发酵制剂；

所述侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCCNo.9060。

所述步骤(2)将侧耳接种量为中药茯苓、天竺黄、六神曲、平菇、马勃、木耳、银耳中的一种或二种以上的质量百分比1-5％，并在温度为35-70℃、湿度为9g/m³条件下发酵1-7天，得到的侧耳发酵物中侧耳质量分数为10-30％

所述步骤(3)中，侧耳发酵物占中药原料药药质量的10-30％。

最终所得中药微生物发酵制剂可制成散剂、片剂、丸剂、胶丸、胶囊剂、乳剂、糖浆或口服液。

上述中药微生物发酵制剂可用于制备预防或治疗高血压、脑动脉硬化、脑萎缩、脑血栓、脑梗塞及其后遗症的药物；所述后遗症指偏瘫(半身不遂)、四肢麻木、语言障碍、头痛、头晕、眼花、耳鸣、失眠、反应迟钝、应激差、记忆力减退等。

本发明提供的中药微生物发酵制剂具有活血化瘀、温经通络、消肿降压、镇静安神、扶正固本中和调理的作用，有效降低预后复发率；本发明为纯发酵微生物中药制剂，无毒无副作用，安全可靠；另外，本发明在继承中药炮制学发酵法基础上，结合现代生物工程的发酵技术，利用侧耳对中药材进行发酵处理，增加了药物的疗效和利用率；最终提高有效疗效20％以上。

具体实施方式

实施例1

发酵微生物中药微生物发酵制剂的制备：

1.按重量份数计，取水蛭7份，地龙25份，川芎15份，三七7份，天麻5份，冰片5份，白芷25份，僵蚕15份，黄芪25份，银杏10份，全蝎5份，郁金15份，人参15份，黄芩15份，丹参20份，羌活15份，葛根35份，何首乌30份，红花15份，安息香25份，人工麝香3份，以上中药，除冰片外混合粉碎，过100目筛，冰片研细，与其他原料的混合粉末混匀制成中药混合细粉；

2.将侧耳接种于PDA固体培养基，在20℃、培养70小时，得侧耳纯化的单菌落。

3.将单菌落侧耳按质量分数3％接种量接种于茯苓中，50℃发酵7天，得到侧耳发酵物；

4.取上述中药混合细粉和侧耳发酵物，侧耳发酵物占中药混合细粉质量分数20％混匀，得到产物；

5.上述产物烘干、粉碎，过100目筛，所得细粉为散剂。

所述侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

实施例2

发酵微生物中药微生物发酵制剂的制备：

取水蛭10份，地龙30份，川芎20份，三七10份，天麻10份，冰片8份，白芷30份，僵蚕20份，黄芪30份，银杏15份，全蝎10份，郁金20份，人参20份，黄芩20份，丹参30份，羌活20份，葛根40份，何首乌50份，红花20份，安息香30份，人工麝香5份，以上中药，除冰片外混合粉碎，过110目筛，冰片研细，与其他原料的混合粉末混匀制成中药混合细粉；

2.将侧耳接种于PDA固体培养基，在35℃、培养70小时，得侧耳纯化的单菌落。

3.将单菌落侧耳按质量分数3％接种量接种于茯苓中，70℃发酵7天，得到侧耳发酵物；

5.上述产物烘干、粉碎，过120目筛，所得细粉为散剂。

所述侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060。

实施例3

急性毒性试验(小白鼠最大耐受量)：

观察本实验提供的中药微生物发酵制剂以小白鼠所能接受的最大剂量灌胃给药产生的毒性反应和死亡情况，测定小白鼠的最大耐受剂量，为临床用药的安全性体统动物急性毒性实验参考。

受试药物为上述实施例1制备的散剂，将其用蒸馏水配制成37.5％浓度(g/ml)供试验用。受试动物为昆明种封闭群小白鼠，体重18-22g，由中国医科大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：辽实条合字1号与辽实质合字008。

(1)取小白鼠20只，雌雄各半，禁食不禁水17小时，称体重；

(2)按剂量1ml/20gBW的容积24小时内给药两次，间隔8小时，相当每次剂量为18.75g/kg，日累积剂量为37.5g/kg，给药后常规饲养，观察7天；

结果受试动物健康，未发现受试动物死亡或由药物中毒引起的异常变化。即表明本发明提供的制剂小白鼠灌胃给药的最大耐受量大于或等于37.5g/kg·日，大于或等于临床承认每日试用量0.2g/kg·日的187.5倍，参照中药急性毒性实验要求(中华人民共和国***：新药审批办法《有关中药部分的修订和补充规定》，1992年9月1日起施行)，临床试用4g/次，日服2-3次是安全的。

实施例4

本发明提供的中药微生物发酵制剂对小白鼠凝血时间的影响的测定：

受试药物与受试动物同上，受试药物用蒸馏水配置成20％浓度(g/ml)供试验用。

(1)取雄性小白鼠44只，4禁食不禁水17小时，称体重，随机分为4组，每组11只；

(2)按下表1剂量灌胃给药，每天一次，连续给药3天(不超过动物所能接受的最大容积1ml/20g)；

(3)末次给药后1小时，剪尾尖取血(徐叔云等，药理实验方法字，人民卫生出版社，1982第一版，835)，取血前禁食不禁水17小时，干棉球拭去第一滴血，再以清洁载玻片取一大滴血液，直径约5-10mm，立即开始计时，2min后，每隔30s，用洁净干燥的针头，自血滴边缘向中心轻轻挑动血滴一次，并观察有无纤维蛋白丝被挑起，直至有纤维蛋白丝被挑起为止，记录自血液流出至有纤维蛋白丝被挑起的时间为凝血时间。同时取血，常规方法做血小板计数，以各组平均凝血时间和平均血小板数分别以调和平均法和t检验法进行统计，比较各组的差异显著性。

表1中药微生物发酵制剂对小白鼠凝血时间及血小板数的影响检测结果

***P＜0.001(与对照组比较)

由上表可见，本发明所提供的中药微生物发酵制剂能非常明显地降低血小板数，并有一定延长凝血时间的倾向。目前实验室多以抗凝血作用和对血小板数目的影响作为防治脑血栓等疾病药物的辅助药效学指标，本实施例结果表明，本发明提供的中药微生物发酵制剂能非常明显的降低血小板数目，并有一定的抗凝血倾向(延长了凝血时间)。

实施例5

临床疗效试验：受试药物为实施例1制备的散剂，4g/次，每天2次，饭前温开水冲服，治疗期间患者均未使用其他治疗手段。受试患者为脑血栓(或多发性，伴随或不伴随脑梗塞或脑萎缩)患者200例，患者均不同程度伴随偏瘫(半身不遂)、四肢麻木、语言障碍、头痛、头晕、眼花、耳鸣、失眠、反应迟钝、应激差、记忆力减退、高血压等症状。

临床疗效：按下述临床疗效判断标准，200例患者中，153例患者治愈，其中150例患者2月内治愈，另外3例患者3-4月治愈；显效41例，有效2例，无效4例；治愈率76.5％，有效率98.0％。

血栓临床疗效判断标准：①临床治愈：临床症状消失，功能活动恢复正常；②显效：临床症状明显好转；③有效：临床症状部分好转；④无效：临床症状体征无改变。

病例1)王某，男，58岁，农民，患有脑血栓，半身不遂，伴随头痛、头晕、耳鸣、四肢麻木等症，服药三个月后头痛头晕、四肢麻木、半身不遂症状消失，血栓消失。

病例2)李某，女，58岁，小学教师，患有脑动脉硬化，脑血栓，伴随头痛、头晕眼花、记忆力减退、反应迟钝，用药三个月后血栓消失，头痛、头晕眼花症状消失，记忆力有所提高，大脑思维活动能力明显好转，能够正常工作。

病例3)孙某，男，60岁，工人，多发性脑血栓，脑萎缩，脑梗塞，伴随头痛、头晕、失眠，大脑应激差，半身不遂，口眼歪斜，用药2个月后复诊精神状态良好，自感精力充沛，睡眠得到改善，头痛头晕症状消失，血栓、萎缩消失，连续服药3个月后，大脑应激明显改善，病症基本消失，可以做到生活自理。

所有病例回访均未发现复发。

综上所述，本发明所提供的中药微生物发酵制剂临床治愈率为76.5％，有效率98.0％，且用药过程中和回访中均未发现明显副作用、无复发；能够有效防治高血压、脑动脉硬化、脑萎缩、脑血栓、脑梗塞及其后遗症如偏瘫(半身不遂)、四肢麻木、语言障碍、头痛、头晕、眼花、耳鸣、失眠、反应迟钝、应激差、记忆力减退等。

Claims

1.一种中药微生物发酵制剂，其特征在于：将侧耳的发酵物与中药原料药混合所得，所述中药原料药按重量份数计：水蛭5-10份，地龙20-30份，川芎10-20份，三七5-10份，天麻3-10份，冰片1-8份，白芷20-30份，僵蚕10-20份，黄芪20-30份，银杏5-15份，全蝎3-10份，郁金10-20份，人参10-20份，黄芩10-20份，丹参15-30份，羌活10-20份，葛根30-40份，何首乌20-50份，红花10-20份，安息香15-30份，人工麝香0.1-5份；侧耳发酵物占中药原料药质量的10-30％；

2.按权利要求1所述的制剂，其特征在于：所述中药原料药按重量计：水蛭5-10g，地龙20-30g，川芎10-20g，三七5-10g，天麻3-10g，冰片1-8g，白芷20-30g，僵蚕10-20g，黄芪20-30g，银杏5-15g，全蝎3-10g，郁金10-20g，人参10-20g，黄芩10-20g，丹参15-30g，羌活10-20g，葛根30-40g，何首乌20-50g，红花10-20g，安息香15-30g，人工麝香0.1-5g。

3.一种权利要求1或2所述的中药微生物发酵制剂的制备方法，其特征在于：

(2)将侧耳接种到中药茯苓、天竺黄、六神曲、平菇、马勃、木耳、银耳中的一种或二种以上中发酵，得到侧耳发酵物，待用；

4.按权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)侧耳接种量为中药茯苓、天竺黄、六神曲、平菇、马勃、木耳、银耳中的一种或二种以上的质量百分比1-5％，并在温度为35-70℃、湿度为9g/m³条件下发酵1-7天，得到的侧耳发酵物中侧耳质量分数为10-30％。

5.按权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，侧耳发酵物占中药原料药质量的10-30％。

6.按权利要求3所述的制备方法，其特征在于：最终所得中药微生物发酵制剂可制成散剂、片剂、丸剂、胶丸、胶囊剂、乳剂、糖浆或口服液。

7.一种权利要求1或2所述的中药微生物发酵制剂作为制备预防或治疗高血压、脑动脉硬化、脑萎缩、脑血栓、脑梗塞及其后遗症的药物中的应用。