CN103548693B - 一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:(1)取白及无菌试管苗分切成带苗的单个球茎,接种到MS类原球茎增殖培养基进行增殖培养获得类原球茎;(2)将获得的类原球茎置于MS复壮培养基中进行复壮培养得到带苗的原球茎;(3)将获得的带苗原球茎接种到1/2MS生根培养基上进行生根培养获得健壮小植株。采用本发明得到的白及类原球茎繁殖系数高,复壮时间短,复壮的丛生芽健壮,可在短期内提供成活率高的白及优质种苗,有效解决了白及的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
白及,又名连及草、箬兰、甘根、白根、百笠、白芨、紫蕙,为兰科白及属植物。白及的干燥块茎是我国民间的传统中药,其药用历史源远流长。白及性温、昧苦、甘、辛,具有补肺、散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌、敛疮等功效,主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、肺伤咳血、衄血、金疮出血、痈疽肿毒、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皱裂等。白及止血效果非常好,现在用白及做成胶膜块,用于肝脾手术贴在刀口处,代替血钳子,效果特别好。同时,作为兰科植物,白及株型优美,也是珍贵的野生观赏花卉。
由于白及的疗效确切,利用价值高,经济效益好,市场需求量大,所以近年来白及的野生资源被疯狂采挖,加上天然生境遭到严重破坏,白及的野生自然资源急剧减少,濒临灭绝,被国家列为重点保护的野生药用植物之一。在自然条件下,白及的资源更新非常缓慢,无法跟上市场需要增长的速度,难以维持资源的供需平衡。因此需要大力推广白及的人工栽培,以增加市场供应量,维持供需平衡,实现白及资源的可持续利用。但是种苗的稀缺却是制约着白及人工种植推广的关键问题。白及的种子细小,种子成熟时多处于原胚阶段,在自然条件下需与相适应的真菌共生,萌发率极低,实生苗的栽培也较为困难。另外传统繁育上虽然还可以通过扦插、分株等无性繁殖的方式进行繁殖,但是获得的种苗数量非常有限,成活率极低,所需时间很长,生产上难以实现大面积栽培。而采用生物技术组织培养技术,可以有效快速地提高白及种苗的繁殖速度和质量,实现白及优质种苗的工厂化育苗,以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,它能够快速繁殖出大量优质原球茎,经复壮后可快速繁育出大量成活率高的优良白及种苗、满足生产需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)类原球茎的快速繁殖培养:取白及无菌试管苗,分切成带苗的单个原球茎,接种到MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎,其中MS繁殖培养基中含1.5-5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(2)类原球茎的复壮培养:将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎,其中MS壮苗培养基中含1.0-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(3)带苗的原球茎生根培养:将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(4)炼苗与移栽:步骤(3)获得带根的完整植株后,在室温为25°的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到苗床中,在苗床中生长三个月后移栽大田。
本发明的突出优点在于:
(1)采用生物技术对白及进行组织培养快速繁殖,通过白及类原球茎的繁殖,在短时间内可培育出大量适合栽培种植的白及幼苗,显著提高了白及种苗的增殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足生产上的需要。
(2)在MS繁殖培养基中添加的6-苄基腺嘌呤6-BA、吲哚乙酸IAA和激动素KT属于化学合成物质,价格较常规兰科植物组织培养中添加的有机物便宜,但对白及原球茎增殖系数的影响非常显著,从而大大降低了白及组织培养的成本消耗,达到降低成本的目的。
(3)采用本发明所述的培养方法得到的白及类原球茎的增殖系数达到30-40倍,类原球茎经复壮后,获得的带苗原球茎非常健壮,接种到含有吲哚乙酸IAA、生根粉ABT的生根培养基上,获得的组培苗生根率在95%以上,移栽苗床成活率在90%以上;快速、便捷、高效地进行白及组织培养,实现白及组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)类原球茎的快速繁殖培养:取白及无菌试管苗,分切成带苗的单个原球茎,,接种到MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎,其中MS繁殖培养基中含1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎的增殖系数为20.5;
(2)类原球茎的复壮培养:将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎,其中MS壮苗培养基中含2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎复壮分化率为98%,类原球茎再次增殖的系数为8.8;
(3)带苗的原球茎生根培养:将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中含0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为92.6%;
(4)炼苗与移栽:步骤(3)获得带根的完整植株后,在室温为25°的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到苗床中,在苗床中生长三个月后移栽大田。
实施例2
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)类原球茎的快速繁殖培养:取白及无菌试管苗,分切成带苗的单个原球茎,,接种到MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎,其中MS繁殖培养基中含3.25mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎的增殖系数为26.8;
(2)类原球茎的复壮培养:将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎,其中MS壮苗培养基中含1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎复壮分化率为96.5%,类原球茎再次增殖的系数为4.6;
(3)带苗的原球茎生根培养:将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中含1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为98.2%;
(4)炼苗与移栽:步骤(3)获得带根的完整植株后,在室温为25°的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到苗床中,在苗床中生长三个月后移栽大田。
实施例3
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)类原球茎的快速繁殖培养:取白及无菌试管苗,分切成带苗的单个原球茎,,接种到MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎,其中MS繁殖培养基中含5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎的增殖系数为35.7;
(2)类原球茎的复壮培养:将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎,其中MS壮苗培养基中含1.75mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎复壮分化率为95%,类原球茎再次增殖的系数为6.2;
(3)带苗的原球茎生根培养:将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.25mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为95.6;
(4)炼苗与移栽:步骤(3)获得带根的完整植株后,在室温为25°的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到苗床中,在苗床中生长三个月后移栽大田。
实施例4
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
1)类原球茎的快速繁殖培养:取白及无菌试管苗,分切成带苗的单个原球茎,,接种到MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎,其中MS繁殖培养基中含5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎的增殖系数为29.6;
(2)类原球茎的复壮培养:将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎,其中MS壮苗培养基中含1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,类原球茎复壮分化率为90%,类原球茎再次增殖的系数为3.0;
(3)带苗的原球茎生根培养:将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.4mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,生根率为96.7;
(4)炼苗与移栽:步骤(3)获得带根的完整植株后,在室温为25°的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到苗床中,在苗床中生长三个月后移栽大田。
Claims (1)
1.一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法,包括炼苗与移栽步骤,获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到苗床中,在苗床中生长三个月后移栽大田,其特征在于:该方法还包括以下步骤:
(1)类原球茎的快速繁殖培养:取白及无菌试管苗,分切成带苗的单个原球茎,接种到MS繁殖培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎,其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.5-5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(2)类原球茎的复壮培养:将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎,其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入1.0-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
(3)带苗的原球茎生根培养:将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中,在培养温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株,其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。
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