CN103548693B - 一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：（1）取白及无菌试管苗分切成带苗的单个球茎，接种到MS类原球茎增殖培养基进行增殖培养获得类原球茎；（2）将获得的类原球茎置于MS复壮培养基中进行复壮培养得到带苗的原球茎；（3）将获得的带苗原球茎接种到1/2MS生根培养基上进行生根培养获得健壮小植株。采用本发明得到的白及类原球茎繁殖系数高，复壮时间短，复壮的丛生芽健壮，可在短期内提供成活率高的白及优质种苗，有效解决了白及的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
白及，又名连及草、箬兰、甘根、白根、百笠、白芨、紫蕙，为兰科白及属植物。白及的干燥块茎是我国民间的传统中药，其药用历史源远流长。白及性温、昧苦、甘、辛，具有补肺、散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌、敛疮等功效，主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、肺伤咳血、衄血、金疮出血、痈疽肿毒、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皱裂等。白及止血效果非常好，现在用白及做成胶膜块，用于肝脾手术贴在刀口处，代替血钳子，效果特别好。同时，作为兰科植物，白及株型优美，也是珍贵的野生观赏花卉。
由于白及的疗效确切，利用价值高，经济效益好，市场需求量大，所以近年来白及的野生资源被疯狂采挖，加上天然生境遭到严重破坏，白及的野生自然资源急剧减少，濒临灭绝，被国家列为重点保护的野生药用植物之一。在自然条件下，白及的资源更新非常缓慢，无法跟上市场需要增长的速度，难以维持资源的供需平衡。因此需要大力推广白及的人工栽培，以增加市场供应量，维持供需平衡，实现白及资源的可持续利用。但是种苗的稀缺却是制约着白及人工种植推广的关键问题。白及的种子细小，种子成熟时多处于原胚阶段，在自然条件下需与相适应的真菌共生，萌发率极低，实生苗的栽培也较为困难。另外传统繁育上虽然还可以通过扦插、分株等无性繁殖的方式进行繁殖，但是获得的种苗数量非常有限，成活率极低，所需时间很长，生产上难以实现大面积栽培。而采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高白及种苗的繁殖速度和质量，实现白及优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量优质原球茎，经复壮后可快速繁育出大量成活率高的优良白及种苗、满足生产需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
（1）类原球茎的快速繁殖培养：取白及无菌试管苗，分切成带苗的单个原球茎，接种到MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎，其中MS繁殖培养基中含1.5-5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（2）类原球茎的复壮培养：将步骤（1）中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎，其中MS壮苗培养基中含1.0-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（3）带苗的原球茎生根培养：将步骤（2）中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
（4）炼苗与移栽：步骤（3）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长三个月后移栽大田。
本发明的突出优点在于：
（1）采用生物技术对白及进行组织培养快速繁殖，通过白及类原球茎的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的白及幼苗，显著提高了白及种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
（2）在MS繁殖培养基中添加的6-苄基腺嘌呤6-BA、吲哚乙酸IAA和激动素KT属于化学合成物质，价格较常规兰科植物组织培养中添加的有机物便宜，但对白及原球茎增殖系数的影响非常显著，从而大大降低了白及组织培养的成本消耗，达到降低成本的目的。
（3）采用本发明所述的培养方法得到的白及类原球茎的增殖系数达到30-40倍，类原球茎经复壮后，获得的带苗原球茎非常健壮，接种到含有吲哚乙酸IAA、生根粉ABT的生根培养基上，获得的组培苗生根率在95%以上，移栽苗床成活率在90%以上；快速、便捷、高效地进行白及组织培养，实现白及组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
（1）类原球茎的快速繁殖培养：取白及无菌试管苗，分切成带苗的单个原球茎，，接种到MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎，其中MS繁殖培养基中含1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎的增殖系数为20.5；
（2）类原球茎的复壮培养：将步骤（1）中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎，其中MS壮苗培养基中含2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎复壮分化率为98%，类原球茎再次增殖的系数为8.8；
（3）带苗的原球茎生根培养：将步骤（2）中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率为92.6%；
（4）炼苗与移栽：步骤（3）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长三个月后移栽大田。
实施例2
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
（1）类原球茎的快速繁殖培养：取白及无菌试管苗，分切成带苗的单个原球茎，，接种到MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎，其中MS繁殖培养基中含3.25mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎的增殖系数为26.8；
（2）类原球茎的复壮培养：将步骤（1）中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎，其中MS壮苗培养基中含1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎复壮分化率为96.5%，类原球茎再次增殖的系数为4.6；
（3）带苗的原球茎生根培养：将步骤（2）中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率为98.2%；
（4）炼苗与移栽：步骤（3）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长三个月后移栽大田。
实施例3
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
（1）类原球茎的快速繁殖培养：取白及无菌试管苗，分切成带苗的单个原球茎，，接种到MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎，其中MS繁殖培养基中含5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎的增殖系数为35.7；
（2）类原球茎的复壮培养：将步骤（1）中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎，其中MS壮苗培养基中含1.75mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎复壮分化率为95%，类原球茎再次增殖的系数为6.2；
（3）带苗的原球茎生根培养：将步骤（2）中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.25mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率为95.6；
（4）炼苗与移栽：步骤（3）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长三个月后移栽大田。
实施例4
一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
1）类原球茎的快速繁殖培养：取白及无菌试管苗，分切成带苗的单个原球茎，，接种到MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎，其中MS繁殖培养基中含5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎的增殖系数为29.6；
（2）类原球茎的复壮培养：将步骤（1）中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎，其中MS壮苗培养基中含1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎复壮分化率为90%，类原球茎再次增殖的系数为3.0；
（3）带苗的原球茎生根培养：将步骤（2）中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.4mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率为96.7；
（4）炼苗与移栽：步骤（3）获得带根的完整植株后，在室温为25°的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长三个月后移栽大田。
Claims (1)
1.一种白及类原球茎的组织培养快速繁殖方法，包括炼苗与移栽步骤，获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长三个月后移栽大田，其特征在于：该方法还包括以下步骤：
(1)类原球茎的快速繁殖培养：取白及无菌试管苗，分切成带苗的单个原球茎，接种到MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到类原球茎，其中MS繁殖培养基为MS基本培养基中加入1.5-5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)类原球茎的复壮培养：将步骤(1)中得到的类原球茎置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带苗的原球茎，其中MS壮苗培养基为MS基本培养基中加入1.0-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)带苗的原球茎生根培养：将步骤(2)中得到的带苗原球茎置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养45天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基为1/2MS基本培养基中加入0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、0.3g/L的活性炭、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
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