发明内容
为了解决背景技术中存在的上述技术问题,本发明提供了一种制备过程易于控制以及产品纯度高的将淫羊藿苷转化为淫羊藿素的方法。
本发明的技术解决方案是:本发明提供了一种将淫羊藿苷转化为淫羊藿素的方法,其特殊之处在于:所述将淫羊藿苷转化为淫羊藿素的方法包括以下步骤:
1)酶解反应:
1.1)制备吸附有淫羊藿苷的树脂;
1.2)制备酶分散液;
1.3)将步骤1.1)中所制备的树脂加入步骤1.2)中的酶分散液中形成反应液进行酶解反应;所述酶解反应的条件是在40-50℃条件下水浴加热;
1.4)将步骤1.3)所形成的反应液放置室温后,加入乙酸乙酯进行萃取,并回收乙酸乙酯液;
1.5)将步骤1.4)中得到的乙酸乙酯液浓缩得到固体物质;
1.6)将步骤1.5)中所得到的固体物质减压蒸出乙酸乙酯,备用;
2)酸解反应:
2.1)将酶解反应最终得到的固体物质加入至固体物质重量的10-15倍量的5%的硫酸液中,在水浴加热的条件下持续搅拌并形成分散液,所述水浴加热时的温度是40-50℃;
2.2)将固体物质重量的3-5倍量的树脂加入至步骤2.1)所形成的分散液中;
2.3)将步骤2.2)所得到的反应液放至室温后,加入反应液体积的2-3倍量的乙酸乙酯进行萃取;
2.4)将萃取后的萃取液合并,回收乙酸乙酯液,得淫羊藿素产品。
上述步骤1.1)的具体实现方式是:
1.1.1)将淫羊藿苷加入至淫羊藿苷重量5-8倍的醋酸盐缓冲液中并搅拌分散;
1.1.2)在步骤1.1.1)中所形成的溶液中加入淫羊藿苷重量3-5倍的树脂,搅拌并过夜,形成吸附有淫羊藿苷的树脂;
1.1.3)采用去离子水对步骤1.1.2)所形成的吸附有淫羊藿苷的树脂进行清洗。
上述步骤1.1.1)中醋酸盐缓冲液的pH是4~5。
上述步骤1.1.2)中的树脂是大孔树脂。
上述树脂是D101型、LSD-632型、LSA-700型、XDA-7型或XDA-6型。
上述步骤1.2)的具体实现方式是:
将复合纤维素酶或者β葡萄糖苷酶加入至淫羊藿苷重量5-8倍的醋酸盐缓冲液中并对其进行充分搅拌;所述醋酸盐缓冲液的pH是4~5。
上述复合纤维素酶或者β葡萄糖苷酶的用量不低于淫羊藿苷重量的1/20。
上述步骤1.4)中进行萃取时的乙酸乙酯用量是步骤1.3)中所形成的反应液的2-3倍。
上述步骤2.2)中的树脂是大孔树脂。
上述树脂是D101型、LSD-632型、LSA-700型、XDA-7型或XDA-6型。
本发明的优点是:
本发明将公开一种操作简单,转化率高的将淫羊藿苷转化为淫羊藿素的方法,该方法是将提取好的淫羊藿苷粉末,先吸附,再酶解,再吸附,然后洗脱,将洗脱液浓缩后,再进行吸附,再酸解,再吸附,最后洗脱,将洗脱液浓缩后,即得到淫羊藿素产品。采用本发明公开的制备方法,分离得到的淫羊藿素收率高,收率稳定,操作简单,过程易于控制,产品纯度高。由于加入了树脂,从而更大程度上限制了副反应的发生,使反应进行的更加彻底,而且此反应过程易于控制,有产品收率稳定,收率高的特点。
具体实施方式
本发明的工作原理为:利用大孔吸附树脂对淫羊藿苷、中间产物及淫羊藿素吸附能力的不同。第一部分是酶解反应:反应未发生之前,树脂吸附的为淫羊藿苷,当酶解反应发生时,树脂对生成的中间产物的吸附能力更强,也就是说生成的中间产物置换了原来的淫羊藿苷,从而使反应能够顺利的进行,也保护了生成的中间产物,避免了副反应的发生。第二部分是酸解反应:反应未发生之前,树脂吸附的为中间产物,当酸解反应发生时,树脂对生成的淫羊藿素的吸附能力更强,也就是说生成的淫羊藿素置换了原来的中间产物,从而使反应能够顺利的进行,也保护了生成的淫羊藿素。
实施例1
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为10%,HPLC检测)加入5倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号D101),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将β葡萄糖苷酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在40-50℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将5倍量(固体物质重量)的树脂加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为45℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为59.2%。
实施例2
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为30%,HPLC检测)加入4倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号LSA-700),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在45℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号LSA-700)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为45℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为61.4%。
实施例3
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为30%,HPLC检测)加入4倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号LSA-700),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在45℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号LSA-700)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为45℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为60.4%。
实施例4
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为45%,HPLC检测)加入4倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号D101),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在50℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号D101)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为50℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为61.0%。
实施例5
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为98%,HPLC检测)加入4倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号LSA-700),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在45℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号LSA-700)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为45℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为61.5%。
实施例6
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为80%,HPLC检测)加入4倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号LSD-632),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在48℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号LSD-632)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为50℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为62.1%。
实施例7
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为60%,HPLC检测)加入4倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号D101),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在48℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为45℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号D101)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为48℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为61.8%。
实施例8
酶解过程:
(1)将淫羊藿苷(含量为50%,HPLC检测)加入5倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,搅拌分散开,再加入3倍量(淫羊藿苷重量)的树脂(型号XDA-7),放置过夜,期间并不停搅拌。
(2)将树脂过滤,并用少量水冲洗树脂,备用。
(3)将复合纤维素酶加入到8倍量(淫羊藿苷重量)的醋酸盐缓冲液中,置于适当容器中,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度在48℃。
(4)将第二步的树脂加入到第三步的酶的分散液中,并搅拌,待温度达到规定温度时,开始计时。
(5)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(6)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液。
(7)将乙酸乙酯液浓缩至小体积后,放置,即得到固体物质。
(8)将此固体物质减压蒸出乙酸乙酯后,备用。
酸解过程
(9)将酶解得到的固体物质加入到15倍量(固体物质重量)的5%的硫酸液中,置于适当容器,并用水浴加热,搅拌分散开,并调整水浴温度为48℃。
(10)将4倍量(固体物质重量)的树脂(型号XDA-7)加入到第九步的分散液中,连续搅拌,用水浴加热,调整水浴温度为45℃。
(11)待反应结束后,将反应液放至室温后,加入3倍量(反应液体积)的乙酸乙酯进行萃取。
(12)萃取结束后,将萃取液合并,回收乙酸乙酯液,即得淫羊藿素产品。
(13)淫羊藿苷的转化率为60.8%。