CN103237899B - 大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法 - Google Patents

大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103237899B
CN103237899B CN201180057641.5A CN201180057641A CN103237899B CN 103237899 B CN103237899 B CN 103237899B CN 201180057641 A CN201180057641 A CN 201180057641A CN 103237899 B CN103237899 B CN 103237899B
Authority
CN
China
Prior art keywords
dajianzhong decoction
preparation
dajianzhong
decoction
bioassay
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201180057641.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103237899A (zh
Inventor
金子笃
大野渚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tsumura and Co
Original Assignee
Tsumura and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tsumura and Co filed Critical Tsumura and Co
Publication of CN103237899A publication Critical patent/CN103237899A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103237899B publication Critical patent/CN103237899B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5064—Endothelial cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/507—Pancreatic cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G01N33/9406—Neurotransmitters
    • G01N33/942—Serotonin, i.e. 5-hydroxy-tryptamine
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/415—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from plants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70571—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明的目的在于，提供一种利用简便的体外试验对大建中汤进行生物测定的方法，进而提供利用该方法的大建中汤的准确性更高的质量管理方法。一种大建中汤的药理活性的生物测定方法，其特征在于，该方法在培养的产生血清素的细胞中添加含有大建中汤的受试试样，接着，测定培养上清中的血清素含量，以及一种大建中汤制剂的质量管理方法，其通过该生物测定方法在相同条件下对作为大建中汤其临床上的药理效果已得到认可的参比制剂与受试制剂评价药理活性，评价参比制剂与受试制剂的等效性。

Description

大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法
技术领域
本发明涉及大建中汤的生物测定方法，更详细而言，涉及可使用培养的产生血清素的细胞来定量地评价作为汉方制剂的大建中汤的药理活性值(血清素释放活性)的生物测定方法及使用该方法的大建中汤的质量管理方法。
背景技术
汉方药是将生药共混而成的药物，其活性成分并非完全确定。另外，其不是利用单一的活性成分而发挥效果是利用多个成分来复合作用，因此，为了保证其品质，需要能够以该制剂整体的形式进行评价的测定方法。实际上，美国FDA的植物药指南对汉方药等产品要求利用生物测定等的质量管理。
该质量管理方法有：测定所有认为与药效有关的成分，对它们进行综合评价的方法；以及使用生物材料评价生理活性的生物测定。前者的情况下，在测定的成本、测定方法的确立方面存在问题。另一方面，生物测定有体内(in vivo)试验和体外(in vitro)试验，体内试验的体系在试验设备、试验动物、处理能力等方面存在各种限制，用于汉方药的质量评价伴有困难。
另一方面，体外试验体系不需要特殊的设备，可在短时间内得到稳定的试验结果，因此，期望利用该体系确立生物测定法。但是，对于将自身包含多个有効成分的生药组合而成的汉方药，往往未发现适当的生物测定体系，尚待其确立。
一直以来，作为用于对汉方药大建中汤的药理效果进行质量管理的生物测定方法，已经构建出直接测定由给与大建中汤引起的肠道平滑肌收缩的方法(马格努斯法(Magnus method))(非专利文献1)。
但是，该马格努斯法由于使用从大鼠摘取的肠道，因此，作为以质量评价的常规试验的形式而实施的生物测定方法，使用性差，并且灵敏度、重现性等也不充分。
现有技术文献
专利文献
非专利文献1：日本医科大学医学会杂志(日医大医会誌)，第6卷(3)，第127-129页(2010)，管隼人和内田英二
发明内容
发明要解决的问题
因此，本发明的课题是，提供利用简便的体外试验对大建中汤进行生物测定的方法，进而提供利用该方法的大建中汤的准确性更高的质量管理方法。
用于解决问题的方案
本发明人等着眼于对大建中汤的肠道运动亢进作用、肠道血流增加作用、这些作用与血清素的关系的报道(非专利文献1)，对大建中汤与血清素的关系进行了深入地研究。然后，其结果发现，大建中汤对产生血清素的细胞具有促进血清素释放的作用，通过测定释放的血清素的量，能够测定大建中汤的药理活性值，并且，通过利用该生物测定体系，能够适当进行大建中汤的质量管理，进而完成了本发明。
即，本发明为一种大建中汤的药理活性的生物测定方法，其特征在于，在培养的产生血清素的细胞中添加含有大建中汤的受试试样，接着，测定培养上清中的血清素含量。
另外，本发明为一种大建中汤制剂的质量管理方法，其特征在于，通过上述大建中汤的药理活性的生物测定方法，在相同条件下对作为大建中汤其临床上的药理效果已得到认可的参比制剂与受试制剂评价药理活性，评价参比制剂与受试制剂的等效性。
发明的效果
根据本发明的生物测定方法，能够不受试验设备、试验动物、处理能力等的限制地、利用简单的体外试验来测定大建中汤的药理活性值(血清素释放活性)，并且，通过在对于评价质量而言为适当的浓度范围内进行本试验，能够对大建中汤进行准确性高的质量管理。
附图说明
图1是示出大建中汤浓度与血清素(5-HT)释放量的关系的附图。
图2是示出利用HPLC的培养试样溶液中的血清素的测定结果的附图。图中的(a)示出未添加大建中汤时的血清素(5-HT)的释放，图中的(b)示出添加900μg/ml的大建中汤时的血清素(5-HT)的释放。
具体实施方式
大建中汤通常是在将表1的组成的混合生药的提取物粉末化而成的物质(有时称为无麦芽糖大建中汤)中配混提取物的8倍量左右的粉末麦芽糖(麦芽糖英文名：maltose)而成的。
[表1]
然后，作为成为本发明的生物测定法的对象的大建中汤，还包含在大建中汤中进一步加入作为药物添加物其添加已得到认可的成分并使其制剂化为颗粒等的大建中汤制剂。作为这种制剂化了的大建中汤制剂，例如，可列举出像津村大建中汤提取物颗粒(医疗用)那样作为医疗用药物在市场上销售的产品。
此外，对于上述作为药物添加物其添加已得到认可的成分，可列举出淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等赋形剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂、着色剂、香料等。
对于本发明的大建中汤的生物测定方法，在培养的产生血清素的细胞中添加含有大建中汤的受试试样，由添加后的产生血清素的细胞中的血清素释放量来评价大建中汤的药理活性值。
作为本发明中使用的产生血清素的细胞的例子，可列举出肠嗜铬细胞。该肠嗜铬细胞为内分泌细胞，是可大量产生、分泌存在于生物体内的血清素的细胞。而且，从存在于生物体内的血清素的90%存在于肠道的肠嗜铬细胞内这一事实出发，可以优选使用肠道的肠嗜铬细胞。
进而，作为上述产生血清素的细胞，也可以使用能够产生一定的稳定的血清素的肠嗜铬样的细胞株。肠嗜铬样的细胞株例如可列举出源自大鼠胰腺癌的RIN-14B细胞、源自人胰腺癌的QGP-1细胞、源自人小肠类癌瘤的KRJ-I细胞等。其中，作为特别优选的细胞株，从增殖性优异的方面出发，可列举出RIN-14B细胞。
本发明的大建中汤的生物测定方法如下进行：首先，将产生血清素的细胞在适于其生长的培养基、例如包含抗生素、血清等的RPMI1640等培养基中、例如在37℃下培养1天～3天，然后，通过磷酸盐缓冲液等置换，在其中添加规定量的受试试样后，在相同温度下再培养20分钟～3小时，然后，测定释放到培养基中的血清素量。
含有大建中汤的受试试样通常溶解或悬浮于像二甲基亚砜(DMSO)那样的溶剂而被加入到前述培养基中。
另外，作为测定血清素释放量的方法，只要是可测定血清素释放量的方法，就可以没有特别限制地利用公知方法，作为优选的方法，可列举出酶免疫分析法(EIA法)、HPLC法。
本发明中使用的EIA法是指使酶附着于进行特异性抗原抗体反应的抗原或抗体，并测定酶的活性，从而测定抗原抗体反应的结合量的方法，具体而言，例如，可以使用酶免疫血清素试剂盒(EIA serotonin kit，贝克曼库尔特公司制)等市售的试剂盒来进行。
进而，通过高效液相色谱(HPLC)法测定血清素释放量时，可以适当选择试样的进料量、分析柱的种类、分析柱的直径和长度、分析柱的温度、流动相的组成、流动相流量等条件，选择最适合血清素的分离的条件即可。作为这种条件，优选为血清素的保留时间(retention time)不会与其它的检出物重叠的条件。其中，作为分析柱，可以使用通常使用的柱例如填充有ODS等的柱等，另外，作为检测器，可以使用一般常用的电化学检测器(ECD)等。
在本发明的生物测定方法中，优选的是，在可得到如实施例1的结果所示那样依赖于浓度的反应的浓度范围(0～900μg/mL)内、进一步优选在可得到统计学上显著的反应的浓度范围(90～900μg/mL)内，同时测定多个、优选3个点以上，由此定量受试试样中的大建中汤的药理活性值(血清素释放活性)，条件几乎不变时，也可以使用已利用包含上述浓度范围的浓度的大建中汤的试样制作好的标准曲线进行测定。
通过本发明的生物测定方法进行产品大建中汤的质量评价时，首先，对其临床上的药理效果已得到认可的大建中汤的多个批次测定其药理活性值(血清素释放活性)，根据该值设定标准范围。接着，通过相同方法对期望评价的大建中汤的质量试验用样品测定药理活性值(血清素释放活性)。然后，通过该样品的药理活性值是否处于设定的标准范围内来评价等效性，将认为等效的样品作为合格品，从而进行质量管理即可。
实施例
接着，列举出实施例对本发明进行更详细的说明，本发明不受这些实施例的任何限制。
实施例1
大建中汤的生物测定试验：
(1)受试试样的制备：
将表1的配混比例的生药混合物用其混合物重量的10倍量的纯化水在100℃下加热提取1小时，进行粉末化，从而得到无麦芽糖大建中汤提取物粉末。将该无麦芽糖大建中汤提取物粉末制成100mg/mL浓度的DMSO悬浮液，将其以相对于88.8mg/mL浓度的麦芽糖水溶液为1:9的比例进行混合，制备90mg/mL浓度的大建中汤溶液。将该大建中汤溶液用0.1%的BSA-Hanks缓冲液＊稀释成9mg/mL的浓度，然后，进行15分钟的超声波处理，制备大建中汤受试试样。
另外，作为阳性对照试样，将异硫氰酸烯丙酯(AITC，和光纯药工业株式会社)加入到DMSO中，制备100mmol/L AITC的DMSO溶液。
＊0.1%BSA-Hanks缓冲液
将1g牛血清蛋白、1g葡萄糖、8g氯化钠、400mg氯化钾、47.9mg磷酸一氢钠(无水)、60mg磷酸二氢钾(无水)、46.8mg氯化镁(无水)、48.8mg硫酸镁(无水)、140mg氯化钙(无水)溶解在1升蒸馏水中，制备成pH7.2～7.4。
(2)产生血清素的细胞(RIN-14B细胞)的培养：
将大鼠胰腺癌细胞株RIN-14B(DS Pharma Biomedical Co.,Ltd.制)在加入有10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养基(10mmol/L的HEPES、1.5g/L的NaHCO3、100U/mL青霉素G和100μg/mL链霉素)中进行继代培养，制成产生血清素的细胞。此外，细胞的回收时，使用胰蛋白酶-EDTA液。
(3)血清素(5-HT)释放试验：
将由上述(2)得到的产生血清素的细胞以3×104cells/100μL/孔的量分注到96孔平底板中。进行72小时的预培养后，将培养上清置换为包含由上述(1)得到的各受试试样的0.1%BSA-Hanks缓冲液，在5%二氧化碳培养箱中再培养1小时。
受试试样用包含1%DMSO的0.1%BSA-Hanks缓冲液分段稀释，以培养体系中的最终浓度达到27、90、270、900μg/mL的方式进行添加，使培养体系中的DMSO的最终浓度为0.1%。另外，在阳性对照组中，改变受试试样，将由上述(1)得到的阳性对照试样以在培养体系中的最终浓度达到100μmol/L、DMSO的最终浓度达到0.1%的方式加入。
最后，将320g培养上清在5分钟、4℃的条件下离心处理，将其上清作为5-HT浓度测定用试样(以下称为“测定用试样”)。
(4)利用EIA法的血清素(5-HT)测定：
利用EIA法的5-HT释放测定使用酶免疫血清素试剂盒(贝克曼库尔特公司制)、根据产品附带的说明书进行。
即，在加入有酰化试剂的试管中加入由上述(3)得到的测定用试样，再添加酰化缓冲液50μL，用涡流混合机搅拌直至试剂溶解。在室温、避光条件下进行30分钟的反应，得到酰化反应液。未加测定试样的体系也与上述同样地处理，作为对照。
接着，将各酰化反应液20μL移取到包被有抗5-HT抗体的96孔板的适当的孔中，加入乙酰胆碱酯酶(ACE)-5-HT结合体200μL，在室温、避光条件下边用板混合器振荡边竞争性地孵育3小时。
使用试剂盒附带的洗涤缓冲液，以300μL/孔的量洗涤3次板，去除未结合的物质，然后，加入200μL/孔的ACE基质，放置15～20分钟。确认显色后，加入50μL反应停止剂而使反应停止，测定405nm的吸光度。将其结果示于图1。
如图1的结果所示，加入有27、90、270、900μg/mL浓度的大建中汤的测定试样与未添加的对照相比，上清中的5-HT量明显多，而且具有浓度依赖性，可形成标准曲线。另外，阳性对照的加入有AITC的测定试样与对照相比，也明显显示出高的5-HT浓度，显示出由大建中汤作用于产生血清素的细胞而产生的5-HT。
(5)利用HPLC的血清素(5-HT)测定：
接着，在由(3)得到的测定用试样中，对于900μg/mL大建中汤的试样和对照的试样的培养试样溶液，使用HPLC检测其中所含的5-HT。将其结果示于图2的(a)和图2的(b)(关于5-HT的保留时间，(a)为16.27分钟、(b)为16.11分钟)。
此外，利用HPLC的5-HT分析在以下的条件下进行。另外，5-HT标准液通过以最终浓度达到100mg/L的浓度添加有EDTA的0.1mol/L醋酸水溶液来制备。
HPLC分析条件
微量生物体试样分析***：HTEC-500(EICOM)
数据处理装置：EPC-300(EICOM)
数据分析软件：PowerChrom version2.5.7(eDAQ)
分析柱：EICOMPAK CA-5ODS 2.1mmΦ×150mm
预柱：EICOM PREPAKSET-CA 3.0mmΦ×4mm
流动相：80%0.1M磷酸盐缓冲液(Na+)pH6
20%甲醇
500mg/L 1-辛基磺酸钠(SDS)
50mg/L EDTA·2Na+
流速：230μL/分钟
分析温度：25℃
设定施加电压：+450mV(+400～+450mV)vs Ag/AgCl
工作电极：石墨电极 WE-3G
垫片：GS-25
分析柱：80%
由图2的结果可知，利用HPLC的测定也能够测定血清素释放活性。
产业上的可利用性
根据本发明，进行大建中汤的质量评价时，能够基本不受到试验设备、试验动物、处理能力等的限制地进行试验，进而在适合的浓度范围下进行试验，能够对大建中汤进行准确性高的质量评价。
因此，本发明与现有的大建中汤的生物测定方法相比，能够经济性高、简单地进行质量评价，因而在汉方制剂的质量管理中是极其有利的。

Claims (2)

1.一种大建中汤的药理活性的生物测定方法，其特征在于，在培养的RIN-14B细胞中添加含有大建中汤的受试试样，之后，再培养20分钟～3小时，接着，测定培养上清中的血清素含量，其中，在大建中汤的浓度为90～900μg/mL的范围内进行生物测定。
2.一种大建中汤制剂的质量管理方法，其特征在于，通过权利要求1所述的大建中汤的药理活性的生物测定方法，在相同条件下对作为大建中汤其临床上的药理效果已得到认可的参比制剂与受试制剂评价药理活性，评价参比制剂与受试制剂的等效性。
CN201180057641.5A 2010-12-03 2011-11-28 大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法 Active CN103237899B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2010-270643 2010-12-03
JP2010270643 2010-12-03
PCT/JP2011/077360 WO2012073881A1 (ja) 2010-12-03 2011-11-28 大建中湯のバイオアッセイ方法およびこれを用いる品質管理方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103237899A CN103237899A (zh) 2013-08-07
CN103237899B true CN103237899B (zh) 2016-08-10

Family

ID=46171813

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180057641.5A Active CN103237899B (zh) 2010-12-03 2011-11-28 大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法

Country Status (8)

Country Link
US (1) US9121846B2 (zh)
EP (1) EP2647722B1 (zh)
JP (1) JP5884736B2 (zh)
KR (1) KR101652737B1 (zh)
CN (1) CN103237899B (zh)
HK (1) HK1187376A1 (zh)
TW (1) TW201305349A (zh)
WO (1) WO2012073881A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105796483A (zh) * 2014-12-29 2016-07-27 四川滇虹医药开发有限公司 一种中药口服液及其制备方法
JP2017175999A (ja) 2016-03-29 2017-10-05 株式会社ツムラ 大建中湯の効果予測方法および投与量決定方法
US20220412952A1 (en) * 2019-12-01 2022-12-29 Nanoscent Ltd. Use of a chemiresistor sensor for improving health
CN117214340B (zh) * 2023-09-26 2024-04-23 湖南易能生物医药有限公司 一种包含花椒的中药组合物的质量控制方法及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999021007A1 (en) * 1997-10-23 1999-04-29 Pharmaprint, Inc. Pharmaceutical grade echinacea
US20100129345A1 (en) * 2006-10-06 2010-05-27 Astellas Pharma Inc. Screening method for prokinetic agent

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6379714B1 (en) * 1995-04-14 2002-04-30 Pharmaprint, Inc. Pharmaceutical grade botanical drugs
US6329197B2 (en) * 1996-10-09 2001-12-11 Synaptic Pharmaceutical Corporation DNA encoding galanin GALR3 receptors and uses thereof
US20080293159A1 (en) * 2007-05-24 2008-11-27 Murray Goulburn Co-Operative Co. Ltd. Validation Process

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999021007A1 (en) * 1997-10-23 1999-04-29 Pharmaprint, Inc. Pharmaceutical grade echinacea
US20100129345A1 (en) * 2006-10-06 2010-05-27 Astellas Pharma Inc. Screening method for prokinetic agent

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Dai-kenchu-to enhances accelerated small intestinal movement;Satoh et al.;《Bio. Pharm. Bull》;20011031;1122，1124 *
effects of Dai-kenchu-to on levels of 5-hydroxytryptamine(serotonin) and Vasoactive intestinal peptides in human plasma;Nagano et al;《Bio. Pharm. Bull》;20000331;352 *
profiling of the compounds absorbed in human plasma and urine after oral administration of traditional Japanese(Kampo) medicine, Daikenchuto;Iwabu et al;《Drug Metabolism and Diposition》;20100805;2040，2044，2047 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140001911A (ko) 2014-01-07
TW201305349A (zh) 2013-02-01
HK1187376A1 (zh) 2014-04-04
CN103237899A (zh) 2013-08-07
KR101652737B1 (ko) 2016-09-01
TWI561633B (zh) 2016-12-11
US20130260401A1 (en) 2013-10-03
US9121846B2 (en) 2015-09-01
WO2012073881A1 (ja) 2012-06-07
EP2647722A4 (en) 2015-01-07
JPWO2012073881A1 (ja) 2014-05-19
EP2647722B1 (en) 2016-07-06
EP2647722A1 (en) 2013-10-09
JP5884736B2 (ja) 2016-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Miller et al. A 3D human renal cell carcinoma-on-a-chip for the study of tumor angiogenesis
Zang et al. Cell-based assays in high-throughput screening for drug discovery
Lv et al. Chemical probes for human UDP‐glucuronosyltransferases: a comprehensive review
CN103237899B (zh) 大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法
WO2014200816A1 (en) Method for measuring bile salt export transport and/or formation activity
CN106290890A (zh) 一种改良的人体液显色法真菌1,3‑β‑D‑葡聚糖检测试剂盒及其应用方法
CN106841128B (zh) 一类检测人血清白蛋白的高特异性荧光探针的应用
Vauthier et al. Design and validation of a homogeneous time-resolved fluorescence-based leptin receptor binding assay
CN102041296A (zh) 一种血清低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)匀相法体外诊断试剂
EP3385382A1 (en) Dna aptamer binding to molecular targeting drug and method for detecting molecular targeting drug using same
Moustafa et al. Combined targeting of AKT and mTOR inhibits tumor formation of EpCAM+ and CD90+ human hepatocellular carcinoma cells in an orthotopic mouse model
Cong et al. A truncated DNA aptamer with high selectivity for estrogen receptor-positive breast cancer cells
Hill et al. A review of developmental toxicity screening using zebrafish larvae
JP2017536557A (ja) 薬物の溶解、吸収及び透過の付随評価のためのシステム、並びに該システムを使用する方法
Hu et al. Differential Kat3 usage orchestrates the integration of cellular metabolism with differentiation
Protopopova et al. TRPV2 interaction with small molecules and lipids revealed by cryo-EM
Ivanova et al. Atlantic salmon gill epithelial cell line (ASG-10) as a suitable model for xenobiotic biotransformation
CN106546577A (zh) 人羧酸酯酶1的生物发光检测试剂盒及其使用方法和应用
Blel et al. Pegylated liposomal doxorubicin (Caelyx®) interference with the spectrophotometric Jaffe method for quantitative determination of creatinine in human plasma
CN104788391B (zh) 肉桂酰中性红酰胺(ca‑pz)及其制备与应用
CN104892563B (zh) 一种细胞色素cyp3a4酶特异性探针反应及其应用
Juliachs et al. Circulating SOD2 is a candidate response biomarker for neoadjuvant therapy in breast cancer
CN108796035A (zh) 细胞色素cyp3a7酶的特异性探针反应及其应用
CN105987897A (zh) 一种血管内皮抑制素生物学活性的检测方法
Wittig et al. Antiangiogenic Action of JZL184 on Endothelial Cells via Inhibition of VEGF Expression in Hypoxic Lung Cancer Cells

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1187376

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1187376

Country of ref document: HK