CN102759619A - 一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用 - Google Patents
一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102759619A CN102759619A CN2012102452502A CN201210245250A CN102759619A CN 102759619 A CN102759619 A CN 102759619A CN 2012102452502 A CN2012102452502 A CN 2012102452502A CN 201210245250 A CN201210245250 A CN 201210245250A CN 102759619 A CN102759619 A CN 102759619A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- streptococcus suis
- capsular polysaccharide
- enzyme
- solution
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用,所述的试剂盒还包括抗原酶标板、稀释液A、脱脂奶粉、阳性对照、阴性对照、洗涤液、羊抗猪酶标二抗、显色液A、显色液B、终止液;抗原酶标板是以猪链球菌2型荚膜多糖作为抗原;阳性对照为猪链球菌2型菌免疫过的猪阳性对照血清;洗涤液含有Tween-20的PBS缓冲液;终止液含有氢氟酸溶液;显色液A含有过氧化氢脲的柠檬酸盐缓冲液,显色液B液含TMBpH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液;稀释液A含有Tween-20的PBS缓冲液。试剂盒在检测猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫中的应用。猪链球菌2型荚膜多糖的使用,特异性好,灵敏度高。检测时间短,一般2个小时内即可出结果。
Description
技术领域
本发明涉及动物疫病检测,具体涉及一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒,同时还涉及一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒的用途,适用于检测猪血清中的猪链球菌2型的荚膜多糖的抗体水平。
技术背景
猪链球菌(streptococcus suis)是一种能引起人、猪和其他动物感染、发病的重要致病菌。根据荚膜多糖分型,猪链球菌有35个血清型,即1/2型和1-34型(后来研究认为32和34型属于Streptococcus orisratti)。其中猪链球菌2型(SS2)是毒力最强、流行最广的血清型。国外自1968年荷兰首次报道人感染脑膜炎病例以来已有200多人因感染猪链球菌死亡。在我国,自七十年代以来该病在全国二十多个省市已发生或流行,造成了不同程度的经济损失。2005年6~8月间,四川省资阳市、内江市等地区暴发流行猪链球菌2型病,并导致204人感染,38人死亡。在其它省市也有零星发生。由此可见,该病在我国广泛存在并严重流行,已成为当前严重危害养猪业发展的一种主要疾病,不仅给养猪业造成巨大经济损失,而且给人类也造成了严重的危害。
为了有效地预防和控制猪链球菌2型病,在加强免疫预防的同时,使用特异、敏感、快速、便于操作的诊断和检测方法,为有效预防和控制猪链球菌2型的发生提供有力的手段和重要的工具。
本发明应用提取的猪链球菌2型的荚膜多糖及ELISA检测技术,使试剂盒具有很好的敏感性和特异性,能大通量的检测猪血清中的猪链球菌2型荚膜多糖的抗体。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒,该试剂盒的优点是使用了猪链球菌2型的荚膜多糖作为抗原,使试剂盒的检测具有良好的灵敏性和特异性。
本发明的另一个目的是在于提供了一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒在检测猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫中的应用,将提取的猪链球菌2型荚膜多糖作为抗原包被于聚苯乙烯微孔板上,然后加待检血清孵育,再加入羊抗猪酶标抗体(购自Southern biotechnology associates(SBA)),显色时应出现两种情况,如果待检血清是阳性,那么此时加入的羊抗猪酶标抗体就会继续与阳性血清中的抗体反应,酶标仪检测数值就会越高。如果是待检血清阴性,那么羊抗猪酶标抗体就不会与ELISA板上猪链球菌2型荚膜多糖抗原反应,得到的数值就会低。该试剂盒特异性好、敏感性高。目前国内还无同类商业化的产品。有着良好的应用前景。
为了实现上述的目的,本发明采用以下技术措施:
一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫的试剂盒,包括猪链球菌2型荚膜多糖包被的抗原酶标板。
所述的试剂盒还包括抗原酶标板、稀释液A、脱脂奶粉(市售伊利奶粉)、阳性对照、阴性对照、洗涤液、羊抗猪酶标二抗、显色液A、显色液B、终止液。
所述的抗原酶标板是以猪链球菌2型荚膜多糖作为抗原,在包被聚苯乙烯微孔板时用0.1mol/L,pH9.6的碳酸氢钠溶液作为包被缓冲液。所述的猪链球菌荚膜多糖是从猪链球菌2-LT株(CCTCC NO:M2011282)中提取所得,所述的猪链球菌2-LT株已于2011年8月9日保藏在中国典型培养物保藏中心,CCTCC NO:M2011282。(专利申请号:201110234192.9)
所述的阳性对照为猪链球菌2型菌免疫过的猪阳性对照血清,所述的阴性对照为未感染过和未免疫过猪链球菌的健康猪阴性血清。
所述的洗涤液为含有0.05%(体积比)Tween-20的PBS缓冲液;所述的终止液为含0.25%体积比氢氟酸溶液。
所述的显色液A为含有50mg/mL过氧化氢脲的柠檬酸盐缓冲液,显色液B液为含有0.2mg/mL TMB pH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液。
所述的稀释液A为含有0.05%体积比Tween-20的PBS缓冲液。
一种猪链球菌2型荚膜多糖的制备方法,其制备过程是溶菌酶处理与冷酚提取相结合。具体分为两步:
一、使用改良的溶菌酶处理法(林树乾等,金黄色葡萄球菌荚膜多糖的制备及生物学特性,家畜生态学报,第27卷第6期),将灭活的猪链球菌2型菌液使用灭菌生理盐水洗三遍,再用原菌液1/10体积的0.01mol/L PBS将其重悬,加入终浓度0.1mol/L的甘氨酸,并加入终浓度3mg/L溶菌酶(购自北京普博欣生物科技有限公司),置37℃下过夜(8~10小时),室温14000r/min离心45分钟,收集上清,再加入终浓度为25%的无水乙醇和终浓度为0.1g/L的CaCl2,置2~8℃下作用2小时,12000r/min离心10分钟,收集上清,然后加入终浓度为80%的无水乙醇,置2~8℃下作用12小时,12000r/min离心10分钟,得到的沉淀即为粗制荚膜多糖。
二、用冷酚处理法(林树乾等,金黄色葡萄球菌荚膜多糖的制备及生物学特性,家畜生态学报,第27卷第6期),将粗制多糖进行纯化。将得到的粗制多糖用10ml饱和醋酸钠重悬,加入预冷的苯酚,快速振摇30分钟,8℃4000r/min离心,收集上清液,重复三次,再将所得的的上清液装入透析袋用1mol/L的NaCl溶液透析48小时,收集透析内液,然后加入终浓度为55%的无水乙醇,置2~8℃下作用24小时,12000r/min离心10分钟,取沉淀干燥后用10mlPBS溶解,即为精制荚膜多糖。
一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫的试剂盒在检测猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫中的应用,其步骤是:
1)将脱脂奶粉溶于稀释液A中,使其脱脂奶粉的终浓度为5%,作为待检血清和对照血清的稀释液。
2)取抗原包被板(包被有猪链球菌2型荚膜多糖抗原的检测板),先用稀释好的洗涤液洗板2次,再将稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100μl加入到抗原包被板孔中。待检血清设1孔,阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品(勿溢出),置37℃下温育30分钟。
3)弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟后,弃去洗涤液,并在吸水纸上拍干,重复洗板5次,最后一次在吸水纸上拍干。
4)每孔加羊抗猪酶标二抗100μl,置37℃下温育30分钟后洗板5次(方法同步骤3)。
5)每孔加显色液A、显色液B各一滴(约50μL),混匀,室温(18~25℃,以下相同)避光显色10分钟。每孔加终止液一滴(约50μL),10分钟内用酶标仪测定每孔OD630nm读值。
本发明试剂盒判定标准为:在酶标仪上测各孔OD630nm值,试验成立的条件是;阳性对照孔OD630nm值均应≥0.8,且<2.0;阴性对照孔OD630nm值均应<0.3。如果样品OD630nm值≥0.35,判为阳性;如果样品OD630nm值<0.35,则判为阴性。
本发明具有以下优点和效果:
1.目前国内还无同类商业化的产品
2.由于猪链球菌2型荚膜多糖的使用,特异性好,灵敏度高。
3.操作简单,检测时间短,一般2个小时内即可出结果;
附图说明
图1为一种用苯酚硫酸法测定荚膜多糖时绘制的标准曲线示意图。
图中横坐标为糖浓度,纵坐标为OD值。
图2为一种使用分光光度计对荚膜多糖进行质量检测示意图。
图中横坐标为波长,纵坐标为吸光值。
具体实施方式
为了使本发明更加容易理解,下面将进一步阐述本发明的实施例。结合实施对本发明做进一步的描述和论证。但是本实施例不是对本发明的限制。
实施例1:抗原的制备
1抗原的提取
1.1细菌培养
采用TSA固体培养基传代增菌,第3代菌种以一定的接种量接种于优化的TSB优化液体培养基中,37℃下培养12~14小时,标准细菌比浊管测菌浓度至1.5×109/ml时终止培养,加入千分之五的甲醛,搅拌灭活。
1.2荚膜多糖的提取纯化
1.2.1荚膜多糖的提取
使用改良的溶菌酶处理法,将灭活的猪链球菌2型菌使用灭菌生理盐水洗三遍,再用原菌液1/10体积的0.01mol/LPBS将其重悬,加入终浓度0.1mol/L的甘氨酸,并加入终浓度3mg/L溶菌酶,置37℃下过夜(8~10小时),室温14000r/min离心45分钟,收集上清,再加入终浓度为25%的无水乙醇和终浓度为0.1g/L的CaCl2,置2~8℃下作用2小时,12000r/min离心10分钟,收集上清,然后加入终浓度为80%的无水乙醇,置2~8℃下作用12小时,12000r/min离心10分钟,得到的沉淀即为粗制荚膜多糖。
1.2.2荚膜多糖的纯化
用冷酚处理法,将粗制多糖进行纯化。将得到的粗制多糖用10ml饱和醋酸钠重悬,加入预冷的苯酚,快速振摇30分钟,8℃4000r/min离心,收集上清液,重复三次,再将所得的的上清液装入透析袋用1mol/L的NaCl溶液透析48小时,收集透析内液,然后加入终浓度为55%的无水乙醇,置2~8℃下作用24小时,12000r/min离心10分钟,取沉淀干燥后用10mlPBS溶解,即为精制荚膜多糖。
2.抗原的测定
2.1采用苯酚-硫酸法测荚膜多糖浓度,精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖1g,加入水溶解并定容至100ml容量瓶中,即得到葡萄糖贮备液,精密吸取贮备液0,2,4,6,8,10,12,14,16ml分别置100ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀,即为葡萄糖应用液,分别吸取上述应用液1ml于试管中,加入8%苯酚溶液1ml,混匀后迅速加入浓硫酸5ml,摇匀,40℃~50℃水浴30min,以1号管为对照管在490nm处测定,绘制出标准回归方程。
2.2利用分光光度计对提取并纯化的荚膜多糖抗原进行全波长扫描,以测定抗原里多糖的含量和纯度。
3.结果
3.1用Excel2003统计软件分析处理,根据结果得回归方程,并要求相关系数R2≥0.985。y=0.4163x+0.0024(R2=0.9987)(见图1)。
3.2荚膜多糖抗原质量检测结果
见图2所示,图谱中260和280nm处没有蛋白质和核酸的吸收峰,200nm左右吸收值很高(荚膜多糖样品稀释100倍),这是多糖的特征吸收波峰,证明获得的CPS抗原中杂蛋白质和残留的核酸含量比较低,荚膜多糖抗原纯度较高。
实施例2:抗原包被板的制备
将荚膜多糖抗原用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释为1.25μg/ml,按100μL/孔加于聚苯乙烯微孔板中,置2~8℃下包被过夜(14~18小时),次日取出,弃去孔中的抗原包被液,每孔加入120μl封闭液(见附注1)封闭,置37℃下作用1小时,弃去孔中封闭液后,再每孔加入120μl保护剂(见附注1)37℃作用1小时,弃去孔中保护剂后,拍干,再置37℃干燥2小时,用锡箔封口膜将抗原包被板密封,置2~8℃下保存。
实施例3:对照血清的制备
1.猪链球菌阳性对照血清的制备
选用4周龄健康仔猪。将猪链球菌2型(LT-1株)菌液灭活后浓缩至30亿/ml,第一次加入等量完全弗氏佐剂乳化后作为免疫原;第二次和第三次加入等量不完全弗氏佐剂乳化后作为免疫原;第四次免疫不加佐剂,直接用浓缩的灭活菌液作为免疫原,颈部肌肉注射三次,第一次2ml,第二次4ml,第三次6ml,第四次静脉注射3ml,每次免疫间隔2周。第四次免疫后10日采血,用琼脂扩散试验检测抗体效价,达到1:16以上,从颈动脉采集血液,分离血清,在血清中加入0.04%硫柳汞钠防腐,0.22μm滤膜过滤除菌,无菌分装,每管1ml,置-70℃下保存。
2.猪链球菌阴性对照血清的制备
选用4周龄健康仔猪,经猪链球菌2型琼脂扩散试验和猪链球菌2型PCR试验检测均为阴性。颈动脉采集血液,分离血清,在血清中加入0.04%(体积比)硫柳汞钠防腐,0.22μm滤膜过滤除菌。无菌分装,每管1ml,置-70℃下保存。
实施例4:试剂盒组装:
一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫的试剂盒,包括猪链球菌2型荚膜多糖抗原包被板。
所述的试剂盒还包括酶标板、稀释液A、脱脂奶粉、阳性对照、阴性对照、洗涤液、羊抗猪酶标二抗、显色液A、显色液B、终止液。
所述的抗原包被板是以猪链球菌2型荚膜多糖作为抗原,在包被聚苯乙烯微孔板时用0.1mol/L,pH9.6的碳酸氢钠溶液作为包被缓冲液。所述的猪链球菌荚膜多糖是从猪链球菌2-LT株(CCTCC NO:M2011282)中提取所得,所述的猪链球菌2-LT株已于2011年8月9日保藏在中国典型培养物保藏中心,CCTCC NO:M2011282。
所述的阳性对照为猪链球菌2型菌免疫过的猪阳性对照血清,所述的阴性对照为未感染过猪链球菌的健康猪阴性血清。
所述的洗涤液为含有0.05%体积比Tween-20的PBS缓冲液;所述的终止液为含0.25%体积比氢氟酸溶液。
所述的显色液A为含有50mg/mL过氧化氢脲的柠檬酸盐缓冲液,显色液B液为含有0.2mg/mL TMB pH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液。
所述的稀释液A为含有0.05%体积比Tween-20的PBS缓冲液。
试剂盒的组装含:
(1)抗原包被板 2块(96孔/块)
(2)阴性对照血清 1管(1ml/管)
(3)阳性对照血清 1管(1ml/管)
(4)羊抗猪酶标二抗 1瓶(20ml/瓶)
(5)脱脂奶粉 1管(2.5g/管)
(6)稀释液A 1瓶(50ml/瓶)
(7)底物液A 1瓶(10ml/瓶)
(8)底物液B 1瓶(10ml/瓶)
(9)终止液 1瓶(10ml/瓶)
(10)20倍浓缩洗涤液 1瓶(30ml/瓶)
(11)血清稀释板 2块
(12)说明书 1份
阳性、阴性对照的制备:
将筛选获得的猪链球菌阳性血清加入0.04%(体积比)柳硫汞防腐,0.22μm滤膜过滤除菌,。无菌分装,每管1ml,作为阳性对照;将筛选获得的猪标准阴性血清,加入0.04%(体积比)柳硫汞防腐,0.22μm滤膜过滤除菌,。无菌分装,每管1ml,作为阴性对照。
实施例5:试剂盒的应用
一种荚膜多糖抗体的酶联免疫的试剂盒在检测猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫中的应用,其步骤是:
1)将脱脂奶粉溶于稀释液A中,使其脱脂奶粉的终浓度为5%,作为待检血清和对照血清的稀释液。
2)取抗原包被板(包被有猪链球菌2型荚膜多糖抗原的检测板),先用稀释好的洗涤液洗板2次,再将稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100μl加入到抗原包被板孔中。待检血清设1孔,阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品(勿溢出),置37℃下温育30分钟。
3)弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液200μl,静置3分钟后,弃去洗涤液,并在吸水纸上拍干,重复洗板5次,最后一次在吸水纸上拍干。
4)每孔加羊抗猪酶标二抗100μl,置37℃下温育30分钟后洗板5次(方法同步骤3)。
5)每孔加显色液A、显色液B各一滴(约50μL),混匀,室温(18~25℃,以下相同)避光显色10分钟。每孔加终止液一滴(约50μL),10分钟内用酶标仪测定每孔OD630nm读值。
应用中所使用效果实验的情况如下:
1特异性试验:
将我国猪主要病毒病(PRV、PPV、HCV、PRRSV、FMDV)阳性血清用猪链球菌2型荚膜多糖抗体检测试剂盒检测,检测结果全部为阴性(表1)。
表1我国猪主要病毒病抗血清的检测结果
将我国猪主要病原菌阳性血清(APP、HPS、C群链球菌病阳性血清)用猪链球菌2型荚膜多昂抗体检测试剂盒检测,检测结果全部为阴性(表2)。
表2我国猪主要病原菌抗血清的检测结果
2、敏感性的检测:
将10份不同的猪链球菌阳性血清1:5、1:10~1:1280连续倍比稀释后用猪链球菌2型荚膜多糖抗体检测试剂盒检测,从表3中可以看出,试剂盒敏感性良好。
表3不同稀释倍数的阳性血清检测结果
Claims (3)
1.一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒,包括猪链球菌2型荚膜多糖包被的抗原酶标板,其特征在于:所述的试剂盒还包括抗原酶标板、稀释液A、脱脂奶粉、阳性对照、阴性对照、洗涤液、羊抗猪酶标二抗、显色液A、显色液B、终止液;
所述的抗原酶标板是以猪链球菌2型荚膜多糖作为抗原,在包被聚苯乙烯微孔板时用0.1mol/L,pH9.6的碳酸氢钠溶液作为包被缓冲液;
所述的阳性对照为猪链球菌2型菌免疫过的猪阳性对照血清;
所述的阴性对照为未感染过和未免疫过猪链球菌的健康猪阴性血清;
所述的洗涤液为含有0.05%体积比Tween-20的PBS缓冲液;
所述的终止液为含0.25%体积比氢氟酸溶液;
所述的显色液A为含有50mg/mL过氧化氢脲的柠檬酸盐缓冲液,显色液B液为含有0.2mg/mL TMB pH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液;
所述的稀释液A为含有0.05%体积比Tween-20的PBS缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒,其特征在于:所述的猪链球菌2型荚膜多糖的制备方法,其步骤是:
A、使用改良的溶菌酶处理法,将灭活的猪链球菌2型菌使用灭菌生理盐水洗三遍,再用原菌液1/10体积的0.01mol/L PBS将其重悬,加入终浓度0.1mol/L的甘氨酸,并加入终浓度3mg/L溶菌酶,置37℃下过夜8~10小时,室温14000r/min离心45分钟,收集上清,再加入终浓度为25%的无水乙醇和终浓度为0.1g/L的 CaCl2,置2~8℃下作用2小时,12000r/min离心10分钟,收集上清,然后加入终浓度为80%的无水乙醇,置2~8℃下作用12小时,12000r/min离心10分钟,得到的沉淀即为粗制荚膜多糖;
B、用冷酚处理法,将粗制多糖进行纯化,将得到的粗制多糖用10ml饱和醋酸钠重悬,加入预冷的苯酚,振摇30分钟,8℃4000r/min离心,收集上清液,重复三次,再将所得的的上清液装入透析袋用1mol/L的NaCl溶液透析48小时,收集透析内液,然后加入终浓度为55%的无水乙醇,置2~8℃下作用24小时,12000r/min离心10分钟,取沉淀干燥后用10mlPBS溶解,为荚膜多糖。
3.权利要求1所述的一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫的试剂盒在检测猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012102452502A CN102759619A (zh) | 2012-07-16 | 2012-07-16 | 一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2012102452502A CN102759619A (zh) | 2012-07-16 | 2012-07-16 | 一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102759619A true CN102759619A (zh) | 2012-10-31 |
Family
ID=47054137
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2012102452502A Pending CN102759619A (zh) | 2012-07-16 | 2012-07-16 | 一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102759619A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106093439A (zh) * | 2016-06-01 | 2016-11-09 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种猪链球菌间接血凝检测试剂盒及其应用 |
CN114755406A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-07-15 | 南京农业大学 | 一种猪链球菌9型elisa抗体检测方法及其试剂盒 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11171899A (ja) * | 1997-12-04 | 1999-06-29 | Chisso Corp | 抗豚丹毒モノクローナル抗体およびその利用方法 |
CN1709505A (zh) * | 2005-07-13 | 2005-12-21 | 北京绿竹生物制药有限公司 | 多价细菌荚膜多糖-蛋白质结合物联合疫苗 |
CN101724085A (zh) * | 2008-10-22 | 2010-06-09 | 上海生物制品研究所 | 一种荚膜多糖纯化方法 |
CN102353783A (zh) * | 2011-06-29 | 2012-02-15 | 武汉科前动物生物制品有限责任公司 | 一种检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒及阻断elisa检测方法 |
-
2012
- 2012-07-16 CN CN2012102452502A patent/CN102759619A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11171899A (ja) * | 1997-12-04 | 1999-06-29 | Chisso Corp | 抗豚丹毒モノクローナル抗体およびその利用方法 |
CN1709505A (zh) * | 2005-07-13 | 2005-12-21 | 北京绿竹生物制药有限公司 | 多价细菌荚膜多糖-蛋白质结合物联合疫苗 |
CN101724085A (zh) * | 2008-10-22 | 2010-06-09 | 上海生物制品研究所 | 一种荚膜多糖纯化方法 |
CN102353783A (zh) * | 2011-06-29 | 2012-02-15 | 武汉科前动物生物制品有限责任公司 | 一种检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒及阻断elisa检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
杜文金等: "II型猪链球菌S2株在兔中免疫原性的研究", 《中国预防兽医学报》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106093439A (zh) * | 2016-06-01 | 2016-11-09 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种猪链球菌间接血凝检测试剂盒及其应用 |
CN106093439B (zh) * | 2016-06-01 | 2018-05-15 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种猪链球菌间接血凝检测试剂盒及其应用 |
CN114755406A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-07-15 | 南京农业大学 | 一种猪链球菌9型elisa抗体检测方法及其试剂盒 |
CN114755406B (zh) * | 2022-03-28 | 2023-10-24 | 南京农业大学 | 一种猪链球菌9型elisa抗体检测方法及其试剂盒 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Howard et al. | An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to bovine viral diarrhoea virus (BVDV) in cattle sera | |
CN103048459B (zh) | 检测呼吸道合胞病毒的免疫检测试剂 | |
CN103278635B (zh) | 动物布鲁氏菌病竞争elisa 抗体检测试剂盒 | |
CN105296441B (zh) | 一种牛病毒性腹泻病毒毒株及其应用 | |
CN102305859B (zh) | 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的活毒抗体试剂盒 | |
CN104407137A (zh) | 一种猪瘟病毒强毒株和弱毒株鉴别检测试纸 | |
CN103308684A (zh) | 一种猪伪狂犬病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒 | |
CN104569428B (zh) | 一种肠道病毒71型灭活疫苗抗原酶联免疫检测试剂盒 | |
CN103308688A (zh) | 猪圆环病毒2型IgM抗体ELISA检测试剂盒及制备方法 | |
CN102175853A (zh) | 检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的elisa试剂盒 | |
CN103698514B (zh) | 检测猪胞内劳森氏菌抗体的elisa试剂盒 | |
CN101672849A (zh) | 鹿流行性出血病竞争酶联免疫吸附试验试剂盒及其制备方法和用途 | |
CN101348777B (zh) | A型流感病毒核蛋白捕获elisa抗原诊断试剂盒及专用单克隆抗体 | |
CN106596958B (zh) | 布鲁氏菌病cf-elisa抗体检测试剂盒 | |
CN101936997A (zh) | 人用抗狂犬病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒 | |
CN105348386B (zh) | 抗***o型病毒的单克隆抗体组合及检测试剂盒 | |
CN102759619A (zh) | 一种猪链球菌2型荚膜多糖抗体的酶联免疫试剂盒及应用 | |
CN102286093A (zh) | 一种嗜吞噬细胞无形体抗原及含有该抗原的试剂盒 | |
CN102721812B (zh) | 检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒及其抗体的间接elisa试剂盒 | |
CN102809653A (zh) | 一种检测新布尼亚病毒抗原的elisa试剂盒的制备和应用 | |
CN103293311A (zh) | 一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的间接竞争elisa免疫试剂盒 | |
CN104422771B (zh) | 检测蜱传脑炎病毒的单克隆抗体及其试剂盒 | |
CN103063838A (zh) | 一种鉴别进境动物***感染与免疫的引物及试剂盒 | |
CN105838682A (zh) | 牛病毒病性腹泻病毒特异性单克隆抗体细胞株及其应用 | |
Sugiyama et al. | An immune adherence assay for discrimination between etiologic agents of hemorrhagic fever with renal syndrome |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121031 |