CN102603482A

CN102603482A - 一种银杏叶多组分的分离技术

Info

Publication number: CN102603482A
Application number: CN2012100381038A
Authority: CN
Inventors: 魏巧容; 郭震宇; 张河溪; 吴松刚; 黄建忠; 林金科; 郭耀荣
Original assignee: FUJIAN HUAERKANG BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: FUJIAN HUAERKANG BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-02-20
Filing date: 2012-02-20
Publication date: 2012-07-25
Anticipated expiration: 2032-02-20
Also published as: CN102603482B

Abstract

本发明公开了一种银杏叶多组分的分离技术，以银杏叶为原料，采用超声提取和超临界CO₂萃取—精馏相结合的技术实现有效多组分的分离。首先用不同浓度乙醇两次超声提取银杏叶，过滤得到的滤液和滤渣分别经以下工艺进行：1）将滤渣采用超临界CO₂萃取分离得聚戊烯醇类化合物；萃余物采用“水提醇沉”法分离得到银杏多糖；2）将滤液超滤、浓缩后采用超临界CO₂萃取，在适当的温度和压力下先分离得银杏酚酸类；改变萃取条件，启用精馏柱，采用轴向变温分四段加热，继续萃取分离出银杏萜类内酯和黄酮类化合物。本发明具有有效成分不易被分解破坏、无有害化学试剂残留、提取效率高、分离效果好等优点，同时解决了银杏叶提取物有毒酚酸超标的问题，是一项既环保、经济又可工业化实施的技术。

Description

一种银杏叶多组分的分离技术

技术领域

本发明属于中草药组分分离领域，具体涉及一种银杏叶多组分的分离技术。

背景技术

银杏叶具有很高的药用价值，在我国历代中医论著、历次药典及国外众多研究中均记载了银杏叶及其药用功效。研究表明，银杏叶含有特殊的化学成分是其具有广泛药理作用的重要因素。迄今为止，在银杏叶中发现的化合物已达160多种，包括：黄酮类、萜类内酯、多糖类、酚酸类、聚戊烯醇类等成分。

目前国内外对银杏叶中天然活性成分的分离、深入研究利用主要集中在黄酮类和萜类内酯等方面，而对酚酸类、聚戊烯醇类、多糖类的研究利用比较少。且传统认为，银杏酚酸类具有细胞毒性，可致过敏、致突变，会引起阵发性痉挛、神经麻痹，因此在银杏制品被当作有害物质被严格限制和去除；在大多数银杏叶提取物生产中聚戊烯醇类被作为一种无用成分被去除，很少富集这两类物质。近几年研究发现，银杏酚酸类的总量约占银杏干叶重的1.0%～2.0%,属含量较高的物质，具有强烈的杀虫、抑菌杀菌作用以及抗肿瘤、抗炎和抗氧化等多种药理活性，可用于植物农药的开发和新药的研究；聚戊烯醇类含量为1.0%～2.0%，高于银杏黄酮和萜类内酯，是人体多萜醇含量的100倍，具有明显的生物活性，具有抗肿瘤、辅助化放疗、促进肿瘤细胞凋亡，抗病毒和保护肝损伤及免疫调节的药理作用；银杏多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种活性作用。

目前银杏叶组分分离技术未见有同时分离得到银杏黄酮类、萜类内酯、聚戊烯醇类、银杏多糖和酚酸类的报道。现有方法存在以下不足之处：一、用水或有机溶剂长时间高温提取会分解破坏黄酮类、萜类内酯等组分；二、使用了乙醇以外的丙酮、甲醇、氯仿、石油醚、乙酸乙酯等有毒有害溶剂，造成产品有害溶剂残留，无法用于工业化生产；三、银杏叶中的有毒物质银杏酚酸类没有得到有效控制，大部分产品无法达到国家药典要求；四、利用溶剂法提取，然后用柱层析或高效液相色谱法进行分离纯化的方法存在提取时间长，效率低，溶剂用量大等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种银杏叶多组分的分离技术，先采用超声法提取出银杏叶复合有效成分，然后再经超滤、超临界萃取、精馏等技术分离各组分。本发明具有有效成分不易被分解破坏、无有害化学试剂残留、提取效率高、分离效果好等优点，同时解决了银杏叶提取物有毒酚酸超标的问题，是一项既环保、经济又可工业化实施的技术。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明所述的银杏叶多组分分离技术步骤如下：

（1）取合格银杏叶进行前处理：除杂并干燥至水分≤5%，粉碎过10-24目筛。

（2）往原料中加10-12倍量的75-90%乙醇浸渍60-90分钟，在功率3000-4000W，温度40-45℃的条件下超声提取30-40min后过滤；滤渣再用10-12倍量的60-75%的乙醇超声提取，条件同上，过滤，合并两次滤液备用。

（3）将步骤（2）滤渣采用超临界CO₂萃取，条件为：萃取釜压力25-30MPa，萃取温度50-55℃；分离温度40℃，I级分离釜压力8-10MPa，Ⅱ级分离釜压力6MPa，CO₂流速2-2.5L/min（食品级，纯度≥99.5%），萃取4-5h，分离釜收集得聚戊烯醇类油状物，萃余物备用。

（4）往步骤（3）萃余物中加8-10倍量水，100℃煎煮2h，过滤收集水提液，将水提液浓缩至原体积的1/8-1/l0，冷却后加5倍量的无水乙醇，搅拌均匀，1-4℃密闭冷藏12h，然后在3000-4000r/min条件下离心8-10min，分离得沉淀物；再往沉淀物中加5倍量80%乙醇，搅拌均匀，3000-4000r/min离心8-10min，沉淀干燥得银杏多糖。

（5）将步骤（2）收集的滤液通过截留分子量10000D的超滤器，采用磺化聚醚砜平板超滤膜，控制超滤压力为0.20～0.25MPa，温度为25-30℃进行反复超滤，当截留液体积减少到1/l0 时，加入5 倍体积的75%乙醇，继续超滤，当截留液体积再次降低至原体积的1/10时，停止超滤，收集超滤滤过液, 45-50℃真空减压浓缩至浓缩液体积∶银杏叶生药=1∶1（ml∶g）。（6）将浓缩液采用超临界CO₂设备萃取，条件为：萃取釜压力10-16MPa，萃取温度35-40℃；分离温度35℃，I级分离釜压力8-10MPa，Ⅱ级分离釜压力6MPa，CO₂流速1.5-2L/min（食品级，纯度≥99.5%），萃取30-45 min，收集萃取物得银杏酚酸类乙醇混合液。往萃取物中加5倍体积的水，搅拌，1-4℃密闭冷藏12h；然后在3000-4000r/min条件下离心8-10min，收集沉淀得银杏酚酸类化合物。

（7）将萃取条件调整为：萃取釜压力20-28MPa，萃取温度45-50℃，启用精馏柱（分四节梯度控温），设定从柱底到柱顶的温度依次为：45℃、50℃、55℃、60℃；分离温度40℃，分离釜压力5-8MPa，继续萃取50-70 min，分时段收集萃取物，分别得银杏萜类内酯、黄酮类乙醇溶液，于45-50℃真空减压浓缩至相对密度为1.10-1.20（40℃），浓缩液真空冷冻干燥分别得银杏萜类内酯、黄酮类化合物。

本发明中过滤均采用目数为200-300目的筛网；乙醇的浓度均为体积百分比。

由于受树龄及采摘季节的影响，银杏叶中的有效成分含量变化较大，据文献报道树龄大的银杏叶几乎不能作为生产银杏叶提取物的原料，因此本发明所用的原料优选为2-3年树龄、5-9月份的银杏叶。

上述步骤（2）中第一次提取用的乙醇浓度优选85%，第二次提取用的乙醇浓度优选70%。

上述步骤（6）中萃取条件优选：萃取釜压力14MPa，萃取温度38℃；分离温度35℃，I级分离釜压力9MPa，Ⅱ级分离釜压力6MPa，CO₂流速1.8L/min（食品级，纯度≥99.5%），萃取45 min。

本发明的显著优点在于：1）有效克服了现有技术中破坏成分、有毒化学试剂残留、不利于工业化生产等缺点；2）同时分离得到银杏黄酮类、萜类内酯、聚戊烯醇类、银杏酚酸类、银杏多糖，分离效果好、目标组分纯度高；3）解决了银杏叶提取物有毒酚酸超标的问题。富集上述各类物质，可将其作为原料、中间体应用于保健食品、化妆品、新药和植物农药等产业的研究开发。

附图说明

图1是本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面的实施例可以帮助本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：银杏叶组分分离

原料：3年树龄、6月份采摘的银杏叶。

步骤：

（1）将银杏叶除杂，干燥至水分≤5%，粉碎，称量10-24目的银杏叶3000g。

（2）加10倍量的85%乙醇浸渍60分钟，在超声功率2800W， 42℃的条件下提取30min后过滤；滤渣再用10倍量的70%的乙醇超声提取，条件同上，过滤，合并两次滤液备用。

（3）将步骤（2）滤渣进行超临界CO₂萃取，条件为：萃取釜压力26MPa，萃取温度52℃；分离温度40℃，I级分离釜压力9MPa，Ⅱ级分离釜压力6MPa，CO₂流速2.2L/min（食品级，纯度≥99.5%），萃取4h，分离釜收集得聚戊烯醇类油状物，萃余物备用。

（4）往步骤（3）萃余物中加8倍量水，100℃煎煮2h，过滤收集水提液，将水提液浓缩至原体积的1/8，冷却后加5倍量的无水乙醇，搅拌均匀，2℃密闭冷藏12h，然后在3500r/min条件下离心10min，分离得沉淀物；再往沉淀物中加5倍量80%乙醇，搅拌均匀， 3500r/min离心10min，沉淀于60℃干燥得银杏多糖。

（5）将步骤（2）收集的滤液通过截留分子量10000D的超滤器，用磺化聚醚砜平板超滤膜，控制超滤压力为0.25MPa，温度28℃反复超滤，当截留液体积减少到1/l0 时，加入5 倍体积的75%乙醇，继续超滤，当截留液体积再次降低至原体积的1/10时，停止超滤，收集超滤滤过液，45℃真空减压浓缩至浓缩液体积∶银杏叶生药=1∶1（ml∶g）。

（6）将浓缩液采用超临界CO₂设备萃取，萃取釜24 L，萃取釜压力14MPa，萃取温度38℃；分离温度35℃，I级分离釜压力9MPa，Ⅱ级分离釜压力6MPa，CO₂流速1.7L/min（食品级，纯度≥99.5%），萃取40 min，收集萃取物得银杏酚酸类乙醇混合液。往萃取物中加5倍体积的水，搅拌，1℃密闭冷藏12h；然后在3500r/min条件下离心10min，收集沉淀得银杏酚酸类化合物。

（7）将萃取条件调整为：萃取釜压力25MPa，萃取温度46℃，启用精馏柱（分四节梯度控温），设定从柱底到柱顶的温度依次为：45℃、50℃、55℃、60℃；分离温度40℃，分离釜压力6MPa，继续萃取60 min，0-20 min收集萃取物得银杏萜类内酯乙醇溶液，20-60 min收集萃取物得银杏黄酮类乙醇溶液；于45℃真空减压浓缩至相对密度为1.15（40℃），浓缩液真空冷冻干燥分别得银杏萜类内酯、黄酮类化合物。

实施例2：银杏叶组分分离结果

将实施例1得到的各组分进行检测分析，其化合物质量、纯度、萃取率见表1。

表1 银杏叶组分分离结果

Figure 2012100381038100002DEST_PATH_IMAGE002

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种银杏叶多组分的分离技术，其特征在于：所述的分离技术包含以下步骤：

（1）取银杏叶进行前处理：除杂并干燥至含水率≤5%，粉碎过10-24目筛；

（2）将银杏叶放入10-12倍重量的75-90%的乙醇溶液中浸渍60-90min，在40-45℃的条件下以3000-4000W的功率超声提取30-40min后过滤；滤渣再用10-12倍重量的60-75%的乙醇溶液超声提取，条件同上，过滤，合并两次滤液备用；

（3）将步骤（2）的滤渣采用超临界CO₂萃取，条件为：萃取釜压力为25-30MPa，萃取温度为50-55℃；分离温度为40℃，I级分离釜压力为8-10MPa，Ⅱ级分离釜压力为6MPa，CO₂流速为2-2.5L/min，萃取时间为4-5h，分离釜收集得到聚戊烯醇类油状物，萃余物备用；

（4）往步骤（3）的萃余物中加入10-12倍重量的水，100℃煎煮2h，过滤收集水提液，将水提液浓缩至原体积的1/8-1/l0，冷却后加入5倍体积量的无水乙醇，搅拌均匀，1-4℃密闭冷藏12h，然后在3000-4000r/min条件下离心8-10min，分离得沉淀物；再往沉淀物中加入10-12倍重量的80%的乙醇溶液，搅拌均匀，以3000-4000r/min离心8-10min，沉淀、真空冷冻干燥得银杏多糖；

（5）将步骤（2）收集的滤液通过截留分子量为10000D 的超滤器，采用磺化聚醚砜平板超滤膜，控制超滤压力为0.20～0.25MPa，温度为25-30℃进行反复超滤，当截留液体积减少到1/l0 时，加入5 倍体积量的75%的乙醇溶液，继续超滤，当截留液体积再次降低至原体积的1/10时，停止超滤，收集超滤滤过液, 45-50℃真空减压浓缩至浓缩液体积和银杏叶原料质量比为1∶1；

（6）将步骤（5）的浓缩液采用超临界CO₂设备萃取，条件为：萃取釜压力为10-16MPa，萃取温度为35-40℃；分离温度为35℃，I级分离釜压力为8-10MPa，Ⅱ级分离釜压力为6MPa，CO₂流速为1.5-2L/min，萃取时间为30-45 min，收集萃取物银杏酚酸类乙醇混合液；往萃取物中加入5倍体积量的水，搅拌，1-4℃密闭冷藏12h；然后以3000-4000r/min离心8-10min，收集沉淀银杏酚酸类化合物；

（7）将萃取条件调整为：萃取釜压力为20-28MPa，萃取温度为45-50℃，启用精馏柱，分四节梯度控温，设定从柱底到柱顶的温度依次为：45℃、50℃、55℃、60℃；分离温度为40℃，分离釜压力为5-8MPa，继续萃取50-70 min，分时段收集萃取物，分别得到银杏萜类内酯和黄酮类乙醇溶液，于45-50℃真空减压浓缩至40℃时的相对密度为1.10-1.20，浓缩液真空冷冻干燥分别得银杏萜类内酯和黄酮类化合物；

以上过滤均采用目数为200-300目的筛网；步骤（2）、（4）和（5）中所述的乙醇浓度均为体积百分比；步骤（3）和（6）中所述的CO₂是食品级，纯度≥99.5%。

2.根据权利要求1所述的银杏叶多组分的分离技术，其特征在于：步骤（1）中的银杏叶为2-3年树龄、5-7月份采摘的。

3.根据权利要求1所述的银杏叶多组分的分离技术，其特征在于：步骤（2）中第一次提取用的乙醇浓度为85%，第二次提取用的乙醇浓度为70%；所述的乙醇浓度均为体积百分比。

4.根据权利要求1所述的银杏叶多组分的分离技术，其特征在于：步骤（6）中萃取釜压力为14MPa，萃取温度为38℃；分离温度为35℃，I级分离釜压力为9MPa，Ⅱ级分离釜压力为6MPa，CO₂流速为1.8L/min，萃取时间为45 min；所述的CO₂是食品级，纯度≥99.5%。