CN102526147B

CN102526147B - 一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂

Info

Publication number: CN102526147B
Application number: CN201210075373.6A
Authority: CN
Inventors: 孙武兴; 李青原; 黄海; 秦玉霞
Original assignee: Beijing Zhonghaikang Medical Technology Development Co Ltd
Current assignee: Beijing Zhonghaikang Medical Technology Development Co Ltd
Priority date: 2012-03-21
Filing date: 2012-03-21
Publication date: 2014-04-23
Anticipated expiration: 2032-03-21
Also published as: CN102526147A

Abstract

本发明涉及一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂，旨在提供一种能制备出更高效、更高纯度三七总皂苷的纯化方法，同时解决现有生产技术的不足和缺陷。所述的纯化方法，突破常规的纯化三七总皂苷的方法，充分结合大孔树脂、聚酰胺以及活性炭的不同纯化作用，可有效的除杂、脱色、富集总皂苷，过聚酰胺时，仅水洗一步操作，工艺简单，节省有机溶剂，易于实现工业化生产。本发明还包括三七总皂苷的药物制剂，剂型为粉针剂、水针剂、片剂或胶囊。

Description

一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂

技术领域

本发明属于中药化学领域，特别是涉及一种三七总皂苷的纯化方法及其制剂。

背景技术

三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎。其性温，味甘、微苦，入胃经。功能主治为化瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。主产于云南文山、砚山、广南、马关及广西靖西、睦边、百色等地。

三七中含有多种成分，其中，三七总皂苷为三七的主要活性成分，其主要分布于三七的根及根茎。药理研究结果表明，三七总皂苷具有抑制血小板聚集、预防心脑梗塞、缓解心绞痛、保护脑组织、改善脑血液循环、抗冠心病、增强免疫力、调节血糖和血脂等活性。

现有三七总皂苷的生产纯化工艺，主要通过柱色谱法、溶剂萃取法。目前常用的柱色谱法有硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及大孔吸附树脂法。硅胶柱色谱与凝胶柱色谱法可纯化得到高纯度的皂苷成分，但其操作复杂，费用高，也不适合工艺化生产。大孔吸附树脂是目前工业化生产纯化三七总皂苷的普遍方法，但单一大孔树脂用于分离纯化总皂苷所得物含量不是很高，需要与其他树脂或色谱填料联合应用才能得到高纯度的三七总皂苷，已有联合应用较多的方法包括：大孔吸附树脂-离子交换树脂(阴离子或阳阴离子串联)，大孔吸附树脂-离子交换树脂-氧化铝，大孔吸附树脂-氧化铝；前两者者因应用离子交换树脂，每批次都需酸碱反复前处理和后处理，过程较复杂且耗时，需较高的劳动安全保护，后两者在用氧化铝精制时，需依次水洗、醇洗，工艺较繁琐。

大孔吸附树脂-聚酰胺-活性炭联用技术可有效的除杂、脱色、富集总皂苷，工艺简单，过聚酰胺时，仅水洗一步操作，节省有机溶剂，易于实现工业化生产。

发明内容

本发明旨在提供一种制备更高效、更高纯度三七总皂苷的纯化方法，同时解决现有生产技术的不足和缺陷。

本发明所述的纯化方法，突破常规的纯化三七总皂苷的方法，充分结合大孔树脂、聚酰胺以及活性炭的不同纯化作用，从而得到更高纯度的三七总皂苷。

本发明所述的大孔树脂包括HPD700、HPD400、AB-8、DM130、ADS-7型。

本发明所述的聚酰胺的规格为14-30目、30-60目、80-100目或100目以上。

本发明所述的三七总皂苷，包括三七三醇组皂苷和三七二醇组皂苷，三七三醇组皂苷中主要含有三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁以及人参皂苷Re；三七二醇组皂苷中主要含有人参皂苷Rb₁和人参皂苷Rd，其特征在于，三七三醇组皂苷与三七二醇组皂苷的重量比为2.5～3.5∶1，三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁和人参皂苷Rd的总含量占三七总皂苷的含量≥95％。

本发明旨在通过以下方案来实现：

一种三七总皂苷的纯化方法，其特征在于：以三七主根或根茎为原料，粉碎，过筛，加8-12倍(V/W)50-95％的乙醇低温减压回流提取1-3次，合并提取液，低温减压浓缩至乙醇尽，浓缩液加1倍的去离子水，置于冷藏室24小时，取出，过滤，滤液加入大孔树脂吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用8-12倍的50-95％乙醇洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入聚酰胺树脂柱吸附，用4-8倍的去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40-60倍(V/W)70-95％的乙醇加热溶解，然后加入0.05-2％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷。

所述的低温减压回流、低温减压浓缩的温度为40-60℃。

本发明具有以下优点：

(1)所得产品纯度高，本发明首次采用了大孔树脂-聚酰胺-活性炭联用技术，具有很好的脱色、除杂、富集总皂苷作用，总皂苷的纯度可达到95％以上。

(2)有机残留少，本发明摒弃了传统的溶剂萃取、硅胶柱色谱以及凝胶柱色谱法，采用比较常用、价格便宜、能反复使用的大孔树脂和聚酰胺、活性炭，并将三者联合应用。

大孔树脂选择性的吸附有效皂苷成分，同时不吸附糖等杂质，利用该特征可通过水洗去除糖等大极性杂质。

聚酰胺的作用是选择性好、脱色除杂显著，研究表明，聚酰胺不吸附三七的活性皂苷成分，能够选择性吸附其中的其他有机酸、鞣质、色素杂质，利用该特征可进一步提高总皂苷含量。

活性炭主要用于进一步精制三七总皂苷，起到脱色、改善总皂苷外观的作用。

(3)环保无污染，本发明制备过程中使用的有机溶剂可回收循环利用，不产生影响环境的废水。

(4)能够实现大规模生产。

本发明还提供包含所述三七总皂苷的药物制剂，其含有治疗有效量的三七总皂苷以及药学上可接受的载体。所述药物制剂的剂型可包括口服制剂，如片剂、胶囊等；注射制剂，如粉针、水针等。

本发明对三七总皂苷进行了纯化，更多的保留疗效确切的组分，所制备的三七总皂苷做成粉针后无需乙醇溶解，只需注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液溶解即可，因此，使用更方便，刺激性更小。

具体实施方式：

下面结合具体实施例进一步说明本发明。

制备实施例1：

取干燥三七主根20.0kg，用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用12倍药材重量的浓度为60％乙醇溶液55℃减压回流提取2次，每次2.0小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均匀，置于冷藏室24小时。取出冷藏液，过滤，滤液上HPD-700树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用12倍柱体积的70％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(30-60目)吸附，用8倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40倍(V/W)95％的乙醇加热溶解，然后加入0.5％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷2118.3g(三七总皂苷含量为97.9％，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3.2∶1)。

制备实施例2：

取干燥三七主根20.0kg，用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用12倍药材重量的浓度为60％乙醇溶液50℃减压回流提取2次，每次2.0小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均匀，置于冷藏室24小时。取出冷藏液，过滤，滤液上HPD-400树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用12倍柱体积的70％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(14-30目)吸附，用8倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40倍(V/W)95％的乙醇加热溶解，然后加入0.1％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷2200.3g(三七总皂苷含量为96.8％，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3.0∶1)。

制备实施例3：

取干燥三七主根20.0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用10倍药材重量的浓度为70％乙醇溶液55℃减压回流提取1次，每次3.0小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均匀，置于冷藏室24小时。取出冷藏液，过滤，滤液上AB-8树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用10倍柱体积的80％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(60-80目)吸附，用6倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用50倍(V/W)80％的乙醇加热溶解，然后加入0.5％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷2128.6g(三七总皂苷含量为96.6％，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为2.8∶1)。

制备实施例4：

取干燥三七主根20.0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用10倍药材重量的浓度为70％乙醇溶液60℃减压回流提取1次，每次3.0小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均匀，置于冷藏室24小时。取出冷藏液，过滤，滤液上DM130树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用10倍柱体积的85％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(14-30目)吸附，用6倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用50倍(V/W)80％的乙醇加热溶解，然后加入1.5％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷2234.6g(三七总皂苷含量为95.8％，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为2.5∶1)。

制备实施例5：

取干燥三七主根20.0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用8倍药材重量的浓度为80％乙醇溶液55℃减压回流提取3次，每次1.0小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均匀，置于冷藏室24小时。取出冷藏液，过滤，滤液上ADS-7树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用8倍柱体积的85％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(30-60目)吸附，用4倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用60倍(V/W)70％的乙醇加热溶解，然后加入0.5％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷2114.5g(三七总皂苷含量为98.4％，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3.5∶1)。

制备实施例6：

取干燥三七主根20.0kg，使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎，过3号筛，用8倍药材重量的浓度为80％乙醇溶液55℃减压回流提取3次，每次1.0小时，合并提取液，回收乙醇至尽，浓缩液加1倍体积的纯化水，搅拌均匀，置于冷藏室24小时。取出冷藏液，过滤，滤液上HPD-700树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用8倍柱体积的85％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入到聚酰胺树脂(100目以上)吸附，用4倍去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用60倍(V/W)70％的乙醇加热溶解，然后加入0.5％的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷2216.7g(三七总皂苷含量为97.2％，人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷重量比为3.1∶1)。

制备实施例7：

三七总皂苷粉针

取制备实施例1制得的三七总皂苷100g，乳糖28g，加适量注射用水加热溶解，加入0.3％针用活性炭(w/v)，于40℃保温0.5小时，过滤，加注射用水补充至总体积2000ml，调节pH至6.0～7.0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为：每支含三七总皂苷100mg。

制备实施例8

三七总皂苷粉针

取制备实施例2制得的三七总皂苷200g，甘露醇24g，加适量注射用水加热溶解，加入0.3％针用活性炭(w/v)，于40℃保温0.5小时，过滤，加注射用水补充至总体积4000ml，调节pH至6.0～7.0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为：每支含三七总皂苷200mg。

制备实施例9

三七总皂苷粉针

取制备实施例3制得的三七总皂苷150g，加适量注射用水加热溶解，加入0.3％针用活性炭(w/v)，于40℃保温0.5小时，过滤，加注射用水补充至总体积3000ml，调节pH至6.0～7.0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为：每支含三七总皂苷150mg。

制备实施例10

三七总皂苷粉针

取制备实施例5制得的三七总皂苷250g，加适量注射用水加热溶解，加入0.3％针用活性炭(w/v)，于40℃保温0.5小时，过滤，加注射用水补充至总体积3000ml，调节pH至6.0～7.0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为：每支含三七总皂苷250mg。

制备实施例11

三七总皂苷粉针

取制备实施例6制得的三七总皂苷400g，加适量注射用水加热溶解，加入0.3％针用活性炭(w/v)，于40℃保温0.5小时，过滤，加注射用水补充至总体积4000ml，调节pH至6.0～7.0，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为：每支含三七总皂苷400mg。

制备实施例12

三七总皂苷水针

取制备实施例1制得的三七总皂苷100g，加适量注射用水溶解，加入0.2％针用活性炭(w/v)，于40℃保温0.5小时，冷藏，过滤除碳，调pH值为7.0，加注射用水补充至总体积2000ml，过滤除菌、灌封，制成1000支，即得。规格为：每ml含三七总皂苷50mg。

制备实施例13

三七总皂苷胶囊

取制备实施例1制得的三七总皂苷40g，粉碎成细粉，加入38.5g淀粉，1.6g滑石粉，混匀，填充胶囊，即得。

制备实施例14

三七总皂苷胶囊

取制备实施例3制得的三七总皂苷100g，粉碎成细粉，加入74g淀粉，4g滑石粉，混匀，填充胶囊，即得。

制备实施例12

三七总皂苷片剂

取制备实施例5制得的三七总皂苷100g、交联羧甲基纤维素钠8g、乳糖45.6g混合均匀，用适量聚维酮乙醇溶液制颗粒，干燥，整理后加入2.4g硬脂酸镁，混合均匀，压片即得。

(二)试验实施例

试验实施例1：过敏试验

取制备实施例1-6制备的三七总皂苷，分别用生理盐水溶解制成1ml含50mg三七总皂苷的溶液。

取体重300-400g的健康豚鼠12只，随机分为6组，每组2只，连续3次，间日腹腔注射供试品溶液0.5ml，然后分为两组，每组6只，分别在第一次注射后第14天及第21天静脉注射供试品溶液1ml，在注射后15分钟内，均未出现过敏反应。

试验实施例2：溶血试验

取制备实施例1-6制备的三七总皂苷，分别用生理盐水溶解制成1ml含8mg三七总皂苷的溶液。

2％红血球混悬液的制备：取兔或羊血数毫升，放入含玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白质，使之成为脱纤维血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀，1000r/min离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理盐水配成2％混悬液，供试验用。

试验方法：取试管8支，编号，1-6号管为供试品管，7号管为阴性对照管，8号管为阳性对照管。按表2所示依次加入2％红细胞混悬液、生理盐水或蒸馏水、供试品，混匀后，立即置于37℃恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，观察3小时，如溶液呈透明红色，表示溶血。如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。

表2体外溶血试验

结果发现，1-6号管中红细胞全部下沉，上清液无色透明，且在阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，1-6号管中溶液在3小时内未发生溶血和凝聚。结果表明，受试的三七总皂苷均无溶血，符合规定。

试验实施例3：对大鼠脑血管阻断行为障碍的改善作用

1供试品和对照品

供试品：三七总皂苷1-6(制备实施例1-6)；

阳性对照品：注射用血塞通(冻干)(生产厂家：黑龙江省珍宝岛制药有限公司)，注射用血栓通(冻干)(生产厂家：广西梧州制药(集团)股份有限公司)；

溶媒：生理盐水；

2实验动物

Wistar大鼠，体重210-240g，雌雄兼用

3动物分组及给药

3.1动物分组

将90只成年健康大鼠进行随机分组，每组10只，共分为9组：生理盐水对照组(NS，iv)、三七总皂苷1-6组、注射用血塞通(冻干)组、注射用血栓通(冻干)组。

3.2给药途径

根据拟临床用药途径，生理盐水对照组、三七总皂苷1-6组、注射用血塞通(冻干)组、注射用血栓通(冻干)组均采用静脉给药。

配制方法：试验前加入生理盐水，轻轻摇匀使成透明溶液。

3.3给药量(供试品与阳性对照品均以三七总皂苷计)

静脉给药量为100mg/kg，口服灌胃给药量为200mg/kg。

3.4给药频率

每天1次，连续三天。

4试验方法

大鼠腹腔注射水合氯醛(350mg/ml)麻醉。侧卧固定。于亚无菌手术条件下，经眼外眦与外耳道连线间开口，剪断颧骨，固定创口，在手术显微镜下，颅骨底处开颅窗，暴露大脑中动脉，用高频电刀灼断，止血后，缝合创口，回笼饲养。术后24小时按表1评定缺血损伤程度，根据分数高低搭配分组，并开始给药。药后2小时评分，以后每天给药一次，并在给药后2小时评分。第三次给药，评分后断头。取大脑组织切成5片，常规下TTC染色，用1％甲醛固定后，根据落点法(100点/cm²)计算梗塞面积占脑切片面积的百分比。

5动物给药后反应

5.1观察指标：

观察给药前及给药后的动物行为及脑梗塞面积占脑切片的百分比。动物缺血损伤的行为按表3所列指标观察、打分。分数越高示损伤越严重。

表3MCAO大鼠行为障碍的评分标准

*如介于两级之间时则取两级的平均分

5.2观察时间：在给药前及给药后每天都要观察动物缺血损伤后的行为；在首次给药后三天，即在第三次给药后2小时，对动物行为评为后断头，取脑组织切片、染色、固定，观察并统计脑梗塞面积占脑切片面积的百分比。

6试验结果

6.1数据及统计学处理

各组给药前及各次给药后的分值均表示为平均值

用配对t检验，判定给药前后分值差异的显著性；以分值改善率(药后每天均分/药前分)的组间非配对t检验比较不同组间的疗效。

梗塞面积占脑切片的百分比，以组间非配对t检验判定差异的显著性。

6.2试验结果

各给药组和对照组，给药前及给药期间的每天行为评分如表4所示。由表可见，给药前各组动物的损伤程度比较一致，未见显著差异(P＞0.05)，表明分组合理。从改善率结果看，阳性组和样品组与生理盐水组相比均有显著改善作用，且样品组较阳性对照组改善作用更强。

表4对MCAO大鼠行为评分及其改善率的影响(

X±SD)

*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001与各自给药前相比；^#P＜0.05，^##P＜0.01与NS组对比。

根据对MCAO大鼠脑梗塞面积百分比的影响。三七总皂苷1-6组、注射用血栓通(冻干)、注射用血塞通(冻干)的梗塞面积均小于空白对照组(NS)；其中三七总皂苷1-6组的梗塞面积均小于注射用血塞通(冻干)和注射用血栓通(冻干)，表明增加脑血流量、减少梗塞面积是本发明三七总皂苷改善脑缺血损伤的作用基础之一。

7试验结论

结果显示，制备实施例1-6制备的三七总皂苷均能缩小缺血所致脑梗塞面积，改善脑缺血所致的行为障碍，表明本发明三七总皂苷相比较阳性对照品对局部缺血损伤有显著改善作用，尤其是在总皂苷中人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷的重量比为3.2∶1的条件下，改善效果最明显。此外试验结果也表明，增加脑血流量、减少梗塞面积是本发明三七总皂苷改善脑缺血损伤的作用基础之一。

试验实施例4：对家兔脑血管的影响

1供试品和对照品

供试品：三七总皂苷组(制备实施例1-6)；

溶媒：生理盐水

2实验动物

名称：中国白兔

性别：雌雄兼用

体重：1.5-2.5kg

3动物分组及给药

3.1动物分组

将45只家兔进行随机分组，每组5只，共分为9组：空白对照组、三七总皂苷组、注射用血栓通(冻干)组、注射用血塞通(冻干)组。

3.2给药途经

根据临床用药途径，三七总皂苷组、注射用血塞通(冻干)组、注射用血栓通(冻干)、生理盐水对照组均采用耳缘静脉注射给药。

配制方法：耳缘静脉注射给药，试验前将生理盐水注入粉针安瓿内，轻轻摇匀使成透明溶液；灌胃给药，试验前将生理盐水溶解胶囊内容物和片剂，制成水溶液。

3.3给药量(供试品和阳性对照品均以三七总皂苷计)

静脉给药量为50mg/kg。口服灌胃给药量为100mg/kg。

3.4给药频率

单次给药

4试验方法

各组动物耳缘静脉注射25％乌拉坦(4ml/kg)，仰位固定，切开颈部皮肤，分离两侧总动脉，于左侧颈总动脉处插管，以MPU-0.5型压力换能器测血压曲线，于右侧颈总动脉头端进一步分离，接MF-27型电磁流量计，显示右侧颈内动脉血流，可粗略代表前半部血流量。将针形电极***四肢皮下，测量II导联心电图。上述指标同步记录于RM-46型多导仪上。阳性对照组动物上腹部切口，胃插管，以备给药。

待各项指标稳定30分后，各组动物分别静脉注射给药或灌胃给药，读取红药前后颈内动脉血流量(ICBF)、血压(平均血压，BP)及心率(HR)。

实验结束后，取出全脑称重，计算每100g脑组织血流量(CBF)及脑血管阻力(CVR)。

5动物给药后反应

5.1观察指标：主要观察ICBF，同时观察HR、BP，计算CBF及CVR。

5.2观察时间：60分钟。

6试验结果

6.1数据及统计学处理

各组数据以

表示，以t检验比较给药前后的的差异。

6.2结果见表5。

表5对家兔脑血流量(CBF，ml/100g，min)的影响(

X±SD)

***P＜0.01与给药前比较

根据对家兔脑血流量(CBF)的影响。三七总皂苷组较注射用血塞通(冻干)和注射用血塞通(冻干)明显增加家兔血流量。

7试验结论

首先，本发明三七总皂苷能够显著增加家兔脑血流量、降低脑血管阻力，给药后5-10分钟开始发挥作用，约20分钟时作用最强，作用至少持续30分钟以上，并且在三七总皂苷中人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷的重量比为2.5-3.5∶1时，尤其在其两者的重量比为3.2∶1时，能够显著的增加家兔脑血流量，且对家兔心率及血压无显著性影响。

其次，通过对大鼠脑血管阻断行为障碍的改善药效学研究表明，本发明的三七总皂苷能缩小缺血所致脑梗塞面积，改善脑缺血所致的行为障碍。对家兔脑血管的影响试验结果表明，本发明的三七总皂苷能够显著增加家兔脑血流量、降低脑血管阻力。

最后，本发明所采用的提取纯化工艺步骤少，并且未采用毒性大的有机试剂，所制备的三七总皂苷更容易达到临床用药的要求。经过敏试验及溶血试验表明，该纯度的三七总皂苷均未出现过敏反应和溶血现象，安全性高。

综上所述，通过选择大孔树脂-聚酰胺-活性炭联用技术用于三七总皂苷的分离纯化，可以保证三七总皂苷的高纯度和批次之间的重现性，从而保证产品质量的稳定可控，安全有效。

Claims

1.一种三七总皂苷的纯化方法，以三七主根或根茎为原料，粉碎，过筛，加8-12（V/W）倍50-95%的乙醇低温减压回流提取1-3次，合并提取液，低温减压浓缩至乙醇尽，浓缩液加1倍的去离子水，置于冷藏室24小时，取出，过滤，滤液加入大孔树脂吸附，先用去离子水洗脱，用molish反应和薄层色谱控制洗脱终点，弃去洗脱液，再用50-95%乙醇洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩至0.2g药材/ml，再加入聚酰胺树脂柱吸附，用4-8倍的去离子水洗脱，收集洗脱液，低温减压浓缩，干燥，干品用40-60倍（V/W）70-95%的乙醇加热溶解，然后加入0.05-2%的活性炭，于40℃保温0.5小时，滤膜过滤，收集滤液，低温减压浓缩，55℃真空干燥，即得三七总皂苷提取物，其特征在于，三七总皂苷的含量≥95%，三七总皂苷中人参三醇型皂苷与人参二醇型皂苷的重量比为2.5-3.5：1。

2.根据权利要求1所述的三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，低温减压回流温度为40-60℃。

3.根据权利要求1所述三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，大孔树脂为HPD700、HPD400、AB-8、DM130、ADS-7型。

4.根据权利要求1所述三七总皂苷的纯化方法，其特征在于，聚酰胺的规格为14-30目、30-60目、80-100目或100目以上。

5.一种含有权利要求1所述三七总皂苷的药物制剂，其特征在于，剂型为粉针剂、水针剂、片剂或胶囊。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于，剂型为粉针剂。