CN102336841A

CN102336841A - 一种茶多糖的提取方法

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Publication number: CN102336841A
Application number: CN2011103167690A
Authority: CN
Inventors: 张拥军; 陈萍; 朱丽云; 金晖; 李佳
Original assignee: China Jiliang University
Current assignee: China Jiliang University
Priority date: 2011-10-18
Filing date: 2011-10-18
Publication date: 2012-02-01
Anticipated expiration: 2031-10-18
Also published as: CN102336841B

Abstract

本发明公开了一种茶多糖的提取方法：(1)取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻干燥12～24h后粉碎，过筛，获得茶粉；(2)将茶粉用有机溶剂回流提取2～4h，再用70～90％乙醇水溶液浸泡24～36h，过滤，滤饼干燥，获得预处理后的茶粉；(3)将步骤(2)预处理后的茶粉加水，0～40℃，20～40KHz下超声波提取10～60min，获得一次提取液，将一次提取液离心，获得一次上清液和一次料渣，将一次上清液分离纯化获得茶多糖；本发明所得产品纯度高，抗氧化活性高；工艺条件温和，不易损坏多糖结构，绿色环保，符合保健食品的生产要求，对热敏性多糖活性的保持非常适合；便于工业化生产。

Description

一种茶多糖的提取方法

(一)技术领域

本发明涉及一种茶多糖的提取方法，特别涉及一种从粗老茶叶中提取茶多糖的方法。

(二)背景技术

我国是主要茶叶生产国之一，茶树种植面积约占世界茶园面积的50％，居世界第一，茶叶总产量超过100万吨，约占世界茶叶产量的31％。然而，长期以来仅嫩叶部分得到充分的利用，粗老茶被大量积压在仓库或废弃在茶园，积压的粗老茶20万吨以上，最终只能用作肥料或燃料，造成资源的极大浪费。因而急需发展粗老茶的加工业，在粗老茶深加工上寻找突破口，拓宽产品的适用面，提高产品附加值。

粗老茶中茶多糖的含量远高于嫩茶叶，在中国和日本民间有常饮用粗老茶治疗糖尿病的经验，如日本用30年以上树龄茶树老叶制成的淡茶或酽茶，经临床观察，慢性糖尿病患者饮用后可使尿糖减少，症状减轻直至恢复健康。近年来有关茶多糖及其药理作用的研究报道逐渐增多，茶多糖是茶叶中继茶多酚之后发现的又一重要的生物活性多糖。从20世纪90年代初开始，研究主要集中在粗茶多糖的药理作用方面，研究表明：茶多糖具有抗肿瘤(Richard Béliveau，2004；Fang Y.Z.，1995)、抗氧化(YenG.C.，1997；聂少平，2008)、抗血栓(王淑如，1992)、降血糖(Takeo，T，1998；周杰，1997；汪东风，1994)、增强免疫功能(汪东风，2000)、降血压(Wang & Wang，1991b)、增加冠状动脉血流量(王丁刚，1991)和降血脂(Zhu & Wang，1992)等作用。从中低档粗老茶叶中提取活性茶多糖，不仅有利于茶叶资源的充分利用，提高经济效益，促进茶业发展，解决“三农”问题，而且对预防疾病促进人类健康也有重要意义。

尽管目前有关茶多糖的提取方法已有较多报道，但普遍存在着多糖提取率不高，纯度低等问题。由于同一茶叶原料，采用不同的提取方法所得到的茶多糖性状、纯度不同，生物活性也不相同(张惠玲，1995)，究竟采用何种工艺能够更好地保持茶多糖生物活性，它们如何影响茶多糖结构，一直以来是一个值得研究的课题。提取是茶多糖分离纯化的第一步，直接影响茶多糖得率和生物活性。日本曾就不同提取温度所得茶多糖用于降血糖试验作过研究，而国内的研究都集中在后续的分离纯化方面。探讨茶多糖的提取工艺如何影响其生物活性，并采用合适的分离提取茶多糖方法，以提高茶多糖纯度和活性，将会有巨大的应用前景。

茶多糖提取工艺中温度是影响其生物活性重要因素，虽然茶多糖在热水中溶解性较好，热水浸提得率高于冷水浸提，但同时活性会受到影响。如日本博士蓑和田博士的专利记载，用85℃以上热水浸提，会破坏降血糖有效成分；汪东风等(1996)研究证实，茶多糖热稳定性较差，60℃以上降解加快；而清水岑夫(1990)的研究表明保持茶叶最佳降血糖作用的浸提温度与降糖效果有关，对于绿茶，冰水(0℃)＞温水(40～50℃)＞热水(100℃)，在提取茶多糖时应考虑温度的影响。因此，提取茶多糖时要兼顾得率与活性，超低温粉碎技术和超声波技术是保证低温有效破壁、提高得率与活性的重要手段之一。

超低温粉碎技术是将冷冻与粉碎2种单元操作相结合，使物料在冻结状态下，利用超低温的脆性实现粉碎。它可以粉碎在常温下难以粉碎的物料，使物料颗粒流动性更好、粒度分布更理想，不会因粉碎使物料发热而出现氧化、分解、变色等现象，特别适合诸如功效成分之类物料的粉碎。

超声波是一种20KHz以上的高频机械波，它在溶液体系中产生的声空化过程使液体中空腔的形成、振荡、生长、收缩至崩溃，是集中声场能量并瞬间释放的过程。空化泡崩溃时，在极短的时间和在空化泡周围的极小空间内，可产生大约50Mpa的高压，并伴有强烈的冲击。超声波辐射无论辐射时间长短，解聚分子量有个低限；而且，解聚物具有相当窄的分子量分布，经过超声波降解后的多糖分子量分布具有一定的规律性，即不管处理前多糖的分子量分布如何，产物的分子量总分布在较窄的范围内，且超声降解不会引起多糖空间构象发生变化，可以保持原有活性。如李翔等用超声波降解黑木耳酸性杂多糖后，其相对分子质量和相对分子质量分散度指数均随时间增加而降低，超声波不影响该多糖的糖醛酸含量。认为可采用超声波方法制备系列不同相对分子质量的酸性杂多糖。并且认为，超声波更容易打断相对分子质量较大的链，随相对分子质量的降低被打断的可能性变小；相对分子质量的降低是逐步进行的，不会存在大量过高或过低的相对分子质量的碎片。

由于茶多糖是一种酸性杂多糖(SP Nie & MY Xie，2011；李布青1996)，酸性多糖含有较多的带负电荷的糖醛酸，即O原子带有较多负电荷且络合位阻小，故清除·OH活性较高，同时含糖醛酸的多糖分子C原子的正电荷较大且O₂·进攻的他阻较小，故清除O₂·活性较高；酸性杂聚多糖中，糖醛酸含量与抗氧化活性正相关(王元凤，2005)。传统的茶多糖提取采用冷水或温水提取，多糖难以从胞内扩散出来；高温易使茶多糖失活；而酸、碱法容易破坏多糖的结构，降低其生物利用率。本发明采用超低温粉碎技术结合超声波协同作用于粗老茶叶，并在提取过程中以追踪提取物中糖醛酸含量作为同时优化茶多糖提取得率与抗氧化活性的指标，并结合超滤膜处理，进一步提纯多糖，为茶多糖保健食品的开发提取一条新的工艺路线和方法，这对于粗老茶叶的综合开发及提高其经济价值具有实际意义。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种茶多糖的提取方法，所述方法以粗老茶叶为原料，利用超低温粉碎技术结合超声波提取工艺，采用乙醇沉淀与超滤膜处理，所得茶多糖纯度高，抗氧化活性高，工艺条件温和，绿色环保。

本发明采用的技术方案是：

一种茶多糖的提取方法，所述方法为：(1)取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻干燥12～24h后粉碎，过60～100目筛，获得茶粉；所述粗老茶叶是采摘于属山茶科(Theaceae)，山茶属(Camellia)植物，通常指夏季从茶树采摘的粗老叶片，口感苦涩，多为低档茶叶，未加工；(2)将茶粉用有机溶剂回流提取2～4h，再用70～90％乙醇水溶液浸泡24～36h，去除小分子杂质，过滤，滤饼干燥，获得预处理后的茶粉；所述有机溶剂为无水乙醇、***或石油醚；3)将步骤(2)预处理后的茶粉加水，0～40℃，20～40KHz下超声波提取10～60min，获得一次提取液，将一次提取液离心，获得一次上清液和一次料渣，将一次上清液分离纯化获得茶多糖，所述预处理后的茶粉与水的质量比为1∶20～80。

所述步骤(1)冷冻干燥时间为18h。

所述步骤(2)有机溶剂优选为无水乙醇。

所述步骤(2)茶粉与有机溶剂的质量比为1∶3～5，所述80％乙醇溶液的体积用量对本发明没有影响，通常能够浸没原料即可。

所述步骤(3)预处理后的茶粉与水的质量比优选为1∶30～50。

进一步，优选所述步骤(3)预处理后的茶粉与水混合，10～20℃，20～30KHz下超声波提取40min，获得一次提取液。

所述步骤(3)中一次上清液分离纯化方法为：将一次上清液用30～90％乙醇沉淀，离心，获得上清液A和沉淀A，将沉淀A溶于水，浓缩后加入硅藻土和活性炭的混合物，搅拌，过滤，滤液用50～200kD的超滤膜进行超滤膜过滤，收集未滤过膜的物质，浓缩，真空干燥，获得所述茶多糖，所述硅藻土和活性炭的混合物加入量以一次上清液质量计为2～8wt％，所述混合物中硅藻土与活性炭质量比为1∶3。

所述超滤膜优选为聚醚砜膜，所述聚醚砜膜为50～200kD聚醚砜膜，优选100kD聚醚砜膜。

所述硅藻土和活性炭混合物加入量以上清液A质量计优选为5wt％。

所述真空干燥为微波真空干燥，微波频率2450MHz，微波功率1kW，真空度为35～45mmHg，干燥10～30min。

进一步，所述的茶多糖的提取方法，所述步骤(3)中超声提取进行N次，所述的N为2～5的整数，离心，将一次料渣加水，10～20℃，10～30KHz下超声波提取20～40min，获得二次提取液，将二次提取液离心，获得二次上清液和二次料渣，再将二次料渣进行下一次超声提取，以此类推，完成提取后，得到第N次料渣和1～N次上清液，合并所有上清液，将所有上清液用30～90％乙醇沉淀，获得上清液B和沉淀B，将沉淀B溶于水浓缩后加入硅藻土和活性炭的混合物，搅拌，过滤，滤液用100kD的膜进行膜过滤，收集未滤过膜的物质，浓缩，真空干燥，获得所述茶多糖，所述硅藻土和活性炭的混合物加入量以一次上清液B质量计为2～8wt％，优选5wt％，所述混合物中硅藻土与活性炭质量比为1∶3。

步骤(3)所述的过滤为采用板框过滤机，使用6～8层滤布过滤。

本发明步骤(2)用无水乙醇回流提2h除去茶叶细胞外脂质包围的脂肪，再采用体积分数80％乙醇室温浸泡24h去除茶叶中小分子杂质、单糖、双糖、低聚糖、甙类、生物碱、茶多酚、氨基酸及醇溶性蛋白等物质。

本发明所述的用50～200kD的聚醚砜膜进行膜过滤，优选采用切向流过滤技术，即液体流动方向与过滤方向呈垂直方向的过滤形式，相对于常规的垂直流过滤有着能保持稳定的过滤速度、能连续循环进行过滤和在膜表面不形成凝胶层的特点。

本发明以杭州梅家坞所产的龙井茶树所采的粗老茶叶为原料，采用超低温粉碎结合超声波协同作用于粗老茶叶，确保多糖的抗氧化活性，并结合乙醇沉淀与超滤膜处理，进一步提纯多糖。

本发明采用超低温粉碎技术结合超声波协同作用，在促使多糖有效溶出时确保多糖的抗氧化活性，并结合乙醇沉淀与超滤膜处理，得到的多糖纯度高、活性破坏小。

本发明所述的上清液A和上清液B均为上清液，为区分不同步骤所获得的上清液不同而命名，所述沉淀A和沉淀B均为沉淀，为区分不同步骤所获得的沉淀不同而命名。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：

1)本发明所得产品纯度高，其中多糖含量可高达55％以上，抗氧化活性高；

2)针对温度是提取茶多糖活性的重要影响因素，采用超低温粉碎和超声波协同处理工艺，确保低温有效破壁、提高得率与抗氧化活性；茶粗多糖的得率可达5.94％，比传统的热水浸提机械式粉碎粗粉得到的粗多糖提高了3.09倍，抗氧化活性比传统工艺提高了2.47倍；工艺条件温和，不易损坏多糖结构，绿色环保，符合保健食品的生产要求；

3)所采用的超低温冷冻预处理技术可以使物料颗粒流动性更好、粒度分布更理想，不会因粉碎使物料发热而出现氧化、分解、变色等现象，特别适合诸如茶叶中茶多酚类成分在粉碎时由于物料发热而出现氧化、变色，影响后续茶多糖的精制，同时该技术对热敏性多糖活性的保持非常适合；

4)采用乙醇沉淀结合超滤膜处理提纯茶多糖，可以确保产品纯度高，处理量大，尤其切向流超滤技术应用到茶多糖的制备中，在过滤的同时也对聚醚砜膜表面冲刷，使膜表面不会形成杂质，确保稳定快速的超滤速度，大大缩短工艺时间，提纯过程中的同时亦对样液进行浓缩与脱色，便于工业化生产。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1

1材料与试剂

新鲜粗老茶叶(西湖龙井，由杭州龙冠实业有限公司提供)；1，1-二苯基苦基苯肼、无水乙醇、甲苯、咔唑、半乳糖醛酸、苯酚、浓硫酸，均为分析纯。

2实验仪器

UV-2000紫外分光光度计；DFY-400粉碎机；SANYO超低温冰箱；RE-52A旋转蒸发器；WVD-01微波真空干燥箱。

3实验方法

1)粗老茶叶预处理

取1000g新鲜粗老茶叶在-80℃超低温冷冻18h后冷冻粉碎，过60目筛，得到茶粉，用无水乙醇回流提3h除去茶叶细胞外脂质包围的脂肪，再采用体积分数80％乙醇室温浸泡24h，过滤，去除茶叶中小分子杂质、单糖、双糖、低聚糖、甙类、生物碱、茶多酚、氨基酸及醇溶性蛋白等物质，然后将滤饼晒干备用，获得预处理后的茶粉186g。

2)茶多糖的提取工艺

取步骤1)得到的预处理后的茶粉30g与水混合(预处理后的茶粉与水的质量比为1∶20～80)，采用超声波技术提取茶粗多糖，0～40℃，20～40KHz下超声波提取10～60min，超声波提取工艺见表1正交设计，获得提取液，将提取液离心，获得上清液和沉淀。

表1茶多糖提取工艺正交设计

3)茶多糖的制备

取步骤2)的上清液加入体积分数70％的乙醇水溶液沉淀，将沉淀物溶于水旋转蒸发除去残留乙醇，取蒸发除去乙醇的液体用100kD聚醚砜膜(密理博中国有限公司)进行膜过滤，采用切向流超滤技术，压力不超过0.4MPa，收集未滤过膜的大分子，浓缩，大分子浓缩溶液微波真空干燥(微波频率2450MHz，微波功率1kW，真空度为35～45mmHg，干燥10～30min)，获得茶多糖。

4)茶多糖溶出量计算

茶多糖采用改良的苯酚-硫酸法对其进行含量测定：

a)标准曲线：取葡萄糖20mg于500mL容量瓶用蒸馏水定容，即为葡萄糖标准溶液，取2mL蒸馏水作为空白对照，依次取0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL葡萄糖标准溶液，再用蒸馏水补足2mL，在9个标准样品中加入5％的苯酚1mL，95％浓硫酸5mL，摇匀，室温静置30min，然后在490nm下测量标准样品的吸光值，获得葡萄糖标准曲线回归方程为：Y＝0.0095X-0.018，R²＝0.9975，Y为吸光度，X为多糖含量(μg/mL)。

b)多糖含量测定：取0.6mg步骤3)方法制备的茶多糖用蒸馏水配溶液1mL，定容至100mL，吸取定容后的多糖溶液0.5mL，按a)中方法进行反应，然后以蒸馏水为空白对照，测试490nm处吸光值，根据葡萄糖标准曲线回归方程计算多糖含量，按公式(1)计算茶多糖溶出量：

公式(1)

公式(1)中，C为经过稀释后，测定的多糖含量(μg)，V为提取后得到的上清体积(mL)，N为稀释倍数，v为用于测定的上清体积(mL)，M为供试茶叶的重量(mg)。

5)糖醛酸检测

精密配制0.4mg/mL的半乳糖醛酸水溶液，按照倍数稀释原则分别将其稀释，得到半乳糖醛酸标准溶液系列浓度0.4mg/mL，0.2mg/mL，0.1mg/mL，0.05mg/mL，0.025mg/mL。分别精密量取半乳糖醛酸标准品溶液系列浓度1mL于10mL具塞试管，然后加入浓硫酸溶液6mL，振摇混合，在沸水浴中煮沸5min。以冰水浴冷却至室温，分别加入0.1mg/mL咔唑无水乙醇溶液0.2mL。摇匀后，在沸水与中煮沸10min。冷却摇匀后，以同样处理的重蒸馏水为空白，进行比色，于分光光度计所测得的最大吸收波长(530nm)处依次测定OD值。以OD值为纵坐标，对应的半乳糖醛酸浓度值(mg/mL)为横坐标制作标准曲线，由所得结果建立半乳糖醛酸浓度与吸光度值的线性回归方程。回归方程为：Y＝0.1611X+0.1586，R²＝0.9927，Y为吸光度，X为酸性糖浓度(mg/mL)，根据回归方程计算步骤3)方法提取的茶多糖中酸性糖含量，即取0.6mg茶多糖用蒸馏水配溶液1mL，按上述方法测定茶多糖样品中酸性糖含量。

6)抗氧化检测

茶多糖对DPPH的清除试验：1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)是稳定的有机自由基。DPPH溶于少量的甲苯后(甲苯用量对本发明没有影响，能够溶解DPPH即可)，以50％乙醇水溶液配成0.1g/L的DPPH混合溶液。将步骤3)方法制备的茶多糖用水配制成52mg/L的茶多糖溶液，取0.1mL的52mg/L茶多糖溶液加入5mL DPPH混合溶液中，迅速混匀，在10min内，每隔1min在525nm处测定溶液吸光度，计算吸光度随时间的变化率，以50mg/L的BHT(二丁基羟基甲苯)甲醇溶液为对照样品，同样条件下测定吸光度随时间的变化率，根据公式(2)计算茶多糖抗氧化能力。

抗氧化能力(AA，％)＝[样品吸光度的变化率ΔA/对照样品(50mg/LBHT甲醇溶液)吸光度的变化率ΔA]×100 公式(2)

4实验结果

超声波提取茶多糖工艺的正交试验结果见表2。

表2正交结果与分析

由实验可知，按表1设计超声波提取茶多糖，表2中茶多糖中糖醛酸的含量检测结果可知，其中提取温度对茶多糖中糖醛酸的含量影响最大，其次是提取时间、超声波功率、料水比，即A＞B＞D＞C。超声波提取茶多糖的最佳工艺为A₂B₂C₂D₂，即提取温度20℃，提取时间30min、超声波功率30KHz、料水比1∶40时，所制备的茶多糖中糖醛酸的含量最高。在此条件下，得到茶多糖1.78g，多糖含量58.33％，茶多糖的溶出量为5.94％。

比较例1

实验操作同实施例1，所不同的是，在步骤1)中，取100g粗老茶叶直接经普通机械粗粉碎后，用60目标准筛进行筛分，得到绿茶粗粉；后续的步骤与操作都同实施例1。采用该工艺得到茶多糖1.04g，多糖含量56.16％。茶多糖的溶出量与抗氧化活性分别见下表3、表4。

表3不同粉碎工艺茶多糖的溶出量

	茶叶机械粉碎	茶叶超低温冷冻粉碎
			多糖溶出量(％)	3.47	5.94

由表3可知，茶叶的粉碎工艺对多糖的溶出量有一定影响，原料经超低温冷冻处理后可使多糖溶出量增长，其溶出量是普通机械粉碎的1.71倍。

表4不同粉碎工艺茶多糖的抗氧化性

	茶叶机械粉碎	茶叶超低温冷冻粉碎
			多糖抗氧化能力(AA，％)	46.6	85.3

由表4可知，茶叶的粉碎工艺对多糖的抗氧化能力影响较大，原料经超低温冷冻处理后可使多糖的抗氧化能力保持较高水平，其抗氧化能力是普通机械粉碎的1.83倍。

比较例2

实验操作同实施例1，所不同的是，在步骤1)中，取100g粗老茶叶直接经普通机械粗粉碎后，用60目标准筛进行筛分，得到绿茶粗粉，用无水乙醇回流提2h除去脂肪，再采用体积分数80％乙醇室温浸泡24h去除茶叶中小分子杂质，将原料晒干备用，获得预处理后的茶粉67g。取预处理后的茶粉30g，按料液比1∶60加入去离子水，在40℃条件下提取180min，离心后，沉淀按料液比1∶30加入去离子水，在40℃条件下提取180min，离心，合并两次上清液后浓缩，后续的步骤与操作都同实施例1。采用该工艺得到茶多糖0.576g，多糖含量57.05％。茶多糖的溶出量与抗氧化活性分别见下表5、表6。

表5不同工艺茶多糖的溶出量

	茶叶机械粉碎、热水提取	茶叶超低温冷冻粉碎、超声提取
			多糖溶出量(％)	1.92	5.94

由表5可知，茶叶的提取工艺对多糖的溶出量影响很大，原料经超低温冷冻处理、超声波提取后可使多糖溶出量大大增长，其溶出量是普通机械粉碎、热水提取的3.09倍。

表6不同粉碎工艺茶多糖的抗氧化性

	茶叶机械粉碎	茶叶超低温冷冻粉碎
			多糖抗氧化能力(AA，％)	34.5	85.3

由表6可知，茶叶的提取工艺对多糖的抗氧化能力影响很大，原料经超低温冷冻、超声波提取后可使多糖的抗氧化能力保持较高水平，其抗氧化能力是普通机械粉碎、热水提取的2.47倍。

实施例2

实验操作同实施例1，所不同的是取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻12h，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖1.36g，多糖含量56.84％，茶多糖的溶出量为4.53％，抗氧化能力为81.6％。

实施例3

实验操作同实施例1，所不同的是取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻24h，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖1.73g，多糖含量57.36％，茶多糖的溶出量为5.76％，抗氧化能力为84.7％。

实施例4

实验操作同实施例1，所不同的是取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻18h后冷冻粉碎，过60目筛，得到绿茶粉，用***回流提3h除去茶叶细胞外脂质包围的脂肪，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖1.45g，多糖含量56.24％，茶多糖的溶出量为4.83％，抗氧化能力为82.1％。

实施例5

取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻15h后冷冻粉碎，过60目筛，经脱脂、去除茶叶中小分子杂质后，获得预处理后的茶粉，取预处理后的茶粉与水按质量比1∶30混合，在温度20℃条件下，用40KHz的超声波提取20min，提取2次，离心，合并2次提取得到的上清液，接下来的步骤与操作都同实施例1。干燥时优选微波真空干燥，所述微波频率2450MHz，微波功率1kW，真空度为40mmHg，干燥12分钟，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖1.51g，多糖含量56.31％，茶多糖的溶出量为5.03％，抗氧化能力为78.8％。

实施例6

取粗老茶叶在-80℃超低温冷冻20h后冷冻粉碎，过60目筛，经脱脂、去除茶叶中小分子杂质后，获得预处理后的茶粉，取预处理后的茶粉与水按质量比1∶60混合，在温度40℃条件下，用20KHz的超声波提取60min，提取2次，离心，合并2次提取得到的上清液，接下来的步骤与操作都同实施例1。干燥时优选微波真空干燥，所述微波频率2450MHz，微波功率1kW，真空度为45mmHg，干燥8分钟，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖1.72g，多糖含量55.87％，茶多糖的溶出量为5.74％，抗氧化能力为80.7％。

实施例7

取粗老茶叶超低温冷冻后冷冻粉碎，过60目筛，经脱脂、去除茶叶中小分子杂质后，获得预处理后的茶粉，接下来的步骤与操作都同实施例1，其中，浓缩后加入硅藻土和活性炭的混合物，搅拌，过滤，滤液用50kD的聚醚砜膜进行膜过滤，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖1.85g，多糖含量56.91％，茶多糖的溶出量为6.16％，抗氧化能力为67.4％。

实施例8

实验操作同实施例1，所不同的是取粗老茶叶超低温冷冻后冷冻粉碎，过60目筛，经脱脂、去除茶叶中小分子杂质后，获得预处理后的茶粉，接下来的步骤与操作都同实施例1。其中，浓缩后加入硅藻土和活性炭的混合物，搅拌，过滤，滤液用200kD的聚醚砜膜进行膜过滤，其他操作和条件同实施例1，得到茶多糖0.71g，多糖含量61.25％，茶多糖的溶出量为2.37％，抗氧化能力为40.24％。

Claims

1.一种茶多糖的提取方法，所述方法为：(1)取粗老茶叶在-80℃条件下冷冻干燥12～24h后粉碎，过60～100目筛，获得茶粉；所述粗老茶叶为夏季从茶树采摘的粗老叶片；(2)将所述的茶粉用有机溶剂回流提取2～4h，再用70～90％乙醇水溶液浸泡24～36h，过滤，滤饼干燥，获得预处理后的茶粉；所述有机溶剂为无水乙醇，***或石油醚；(3)将步骤(2)预处理后的茶粉加水，0～40℃，20～40KHz下超声波提取10～60min，获得一次提取液，将一次提取液离心，获得一次上清液和一次料渣，将一次上清液分离纯化获得茶多糖，所述预处理后的茶粉与水的质量比为1∶20～80。

2.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(1)冷冻干燥时间为18h。

3.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(2)有机溶剂为无水乙醇。

4.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(2)茶粉与有机溶剂的质量比为1∶3～5。

5.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(3)中预处理后的茶粉与水的质量比为1∶30～50。

6.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(3)预处理后的茶粉与水混合，10～20℃，20～30KHz下超声波提取40min，获得一次提取液。

7.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(3)中一次上清液分离纯化方法为：将一次上清液用30～90％乙醇沉淀，离心，获得上清液A和沉淀A，将沉淀A溶于水，浓缩后加入硅藻土和活性炭的混合物，搅拌，过滤，滤液用50～200kD的超滤膜进行膜过滤，收集未滤过膜的物质，浓缩，真空干燥，获得所述茶多糖，所述硅藻土和活性炭的混合物加入量以一次上清液质量计为2～8wt％，所述混合物中硅藻土与活性炭质量比为1∶3。

8.如权利要求7所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述超滤膜为50～200kD聚醚砜膜。

9.如权利要求7所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述真空干燥为微波真空干燥，微波功率1kW，真空度为35～45mmHg，干燥10～30min。

10.如权利要求1所述的茶多糖的提取方法，其特征在于所述步骤(3)中超声提取进行N次，所述的N为2～5的整数，离心，将一次料渣加水，10～20℃，10～30KHz下超声波提取20～40min，获得二次提取液，将二次提取液离心，获得二次上清液和二次料渣，再将二次料渣加水进行下一次超声提取，以此类推，完成提取后，得到第N次料渣和1～N次上清液，合并所有的上清液，将所有的上清液用30～90％乙醇沉淀，离心，获得上清液B和沉淀B，将沉淀B溶于水，浓缩后加入硅藻土和活性炭的混合物，搅拌，过滤，滤液用100kD的超滤膜进行膜过滤，收集未滤过膜的物质，浓缩，真空干燥，获得所述茶多糖，所述硅藻土和活性炭的混合物加入量以一次上清液B质量计为2～8wt％，所述混合物中硅藻土与活性炭质量比为1∶3。