CN102335260A

CN102335260A - 基于炮制原理的栀子饮片个性特色的质量评价方法

Info

Publication number: CN102335260A
Application number: CN 201010227070
Authority: CN
Inventors: 肖永庆; 张村; 李丽; 李文; 陈红
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2010-07-15
Filing date: 2010-07-15
Publication date: 2012-02-01

Abstract

本发明提供一种基于炮制原理的栀子饮片个性特色的质量评价方法，属于中药技术领域，该方法是在初步揭示栀子炮制原理的基础上，以栀子炮制过程中变化明显的二萜色素类成分以及环烯醚萜苷的HPLC标准指纹图谱以及代表化合物的含量同时来进行栀子不同饮片的质量评价，该发明在丰富、完善和区分栀子不同饮片质量评价方法的同时，为栀子饮片的规范化生产和临床应用提供依据，对于生、制饮片制定具有个性特色的质量标准提供示范，同时还可用于与栀子药材相关的资源、种植、鉴定、制剂、药效等方面的质量控制和评价。

Description

基于炮制原理的栀子饮片个性特色的质量评价方法

一、技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及中药栀子临床常用饮片的质量评价方法，该方法是基于栀子炒制原理研究而确定。

二、背景技术

饮片入药，生熟异治是中药的鲜明特色和一大优势。中药饮片质量的优劣，直接关系到中医的临床疗效。因此，以现代科学技术方法探索建立科学合理、客观实用、符合中药饮片特点的质量评价方法是稳定饮片质量和确保饮片临床疗效的关键问题。

中药饮片大多经过炒、蒸、煮等不同炮制方法而来，饮片炮制前后的药性和临床功效发生了变化，相应地其生、制饮片的质量评价内容、方法也应有不同。但由于饮片炮制原理基础研究薄弱，多数饮片的质量仅靠外观如色、形、味等或一、二个成分的含量来判断，对于同一个来源不同饮片品种缺乏有针对性的、科学合理的的质量评判标准。因此在基本揭示饮片炮制原理的基础上所制定的具有饮片个性特色的质量评价方法更具有科学性和实用价值。

栀子在临床上常用的饮片有生栀子、炒栀子、焦栀子和栀子炭等，栀子生品苦寒之性甚强，易伤中气；炒焦后苦寒之性得以缓和，且增加止血作用，达到凉血止血之目的。栀子的主要药效成分为以京尼平苷(Geniposide)为代表的环烯醚萜类和以藏红花素(藏红花糖苷-1，Crocin 1)为代表的二萜色素类成分。栀子在炮制过程中上述2类成分在成分组成和量比关系上发生了明显变化，尤以二帖色素类成分变化显著。

《中国药典》(2005年版一部)栀子项下仅规定了栀子药材中栀子苷的含量标准，而收载的炒栀子、焦栀子等缺乏现代科学、专属的质量评价方法，不能有效控制饮片的质量，影响了和制约了栀子不同饮片的生产和临床应用。

三、发明内容

本发明的目的在于针对栀子4种临床常用饮片质控方法的不健全，建立了将传统经验鉴别与“多有效成分定量、指纹图谱定性、结合与其主治、功能相关的药效学研究”的现代科学方法相结合的饮片质量评价模式，提供了一套针对栀子不同饮片的具有个性特色的质量评价方法。该方法利用化学、色谱分析和药效比较等方法，在初步揭示栀子炮制原理研究的基础上，首次发现二萜色素类成分在栀子炮制过程中发生了明显变化，并呈现出一定的规律性。以HPLC指纹图谱和2类(环烯醚萜类、二萜色素类)共6个成分的不同量比关系为评价内容来确定栀子不同饮片的个性特色的质量评价方法。该发明在丰富、完善和区分栀子不同饮片质量评价方法的同时，为栀子饮片的规范化生产和临床应用提供科学依据，同时对于生、熟饮片制定具有个性特色的质量标准提供示范。

为了达到本发明的目的，本方法采用溶剂提取、色谱分离等方法从栀子中分离、鉴定和纯化环烯醚萜及二萜色素类成分，以HPLC指纹图谱进行比较的同时，结合药效学研究，建立HPLC法含量测定方法，通过多批次测定制定含量标准。综合以上实验研究建立栀子各饮片的专属、特色质量评价方法。

本发明主要包括如下步骤：

1、栀子药材应至少为3个道地或主产区共10个批次的药材样品，药材基源为茜草科植物栀子Gardeniajasminoides Ellis的干燥成熟果实，

2、栀子以乙醇渗漉提取，渗漉液减压回收乙醇至无乙醇味，经过大孔吸附树脂和反复柱层析分离，以NMR等方法鉴定化合物结构，至少应累积和纯化2个环烯醚萜苷及4个二萜色素类成分，化合物纯度符合相关规定，可供定性、定量分析及其药效学实验研究用。

3、栀子不同饮片制备应在有丰富炮制经验的一线相关技术人员的指导下，按照《中国药典》或《全国中药炮制规范》相关项下的炮制方法，将果实整粒炮制也可碾碎后制备出栀子不同饮片，栀子不同饮片包括来源于栀子的所有饮片。

4、将栀子样品以大孔吸附树脂法至少分30％、50％和95％等3个部位建立栀子不同饮片的HPLC指纹图谱分析方法；Kromasil C₁₈色谱柱，流动相分别为甲醇-水，甲醇-水以及甲醇-乙腈-1％甲酸梯度洗脱，检测波长至少分别为238nm，440nm，440nm。至少通过2类成分的对照，对不同部位图谱进行归属和比较，确定不同部位的成分分布情况，以中药色谱指纹图谱相似度评价***A版(2004)处理软件得到的标准指纹图谱应用于各饮片的定性鉴别。

5、建立以2个HPLC色谱条件进行二萜色素和环烯醚萜苷等两类至少共6个成分的含量测定方法。Kromasil C₁₈色谱柱，流动相分别为甲醇-乙腈-1％甲酸梯度洗脱和甲醇-水(12∶88)等度洗脱，检测波长分别为440nm，238nm。通过最少10批次测定确定含量标准。可根据各饮片中不同主要成分的含量为依据，进行其炒制工艺优化及不同饮片的质量评价。

6、加热炮制和HPLC分析实验证明了栀子色素类成分在炒制过程中的变化规律，随着受热强度的升高，藏红花酸糖苷-1(Crocin 1)逐步向藏红花酸糖苷-2(Crocin 2)、藏红花酸糖苷-3(Crocin 3)和藏红花酸(Crocetin)转变。

7、药效学实验研究表明：Crocetin的止血作用强于Crocin 1。药代动力学研究表明，口服藏红花酸比藏红花糖苷-1吸收好，且止血作用强于藏红花酸糖苷-1。藏红花酸和藏红花糖苷-1对总胆红素有降低作用(P＜0.05)，而且藏红花酸的作用较强于藏红花糖苷-1(P＜0.05)。此结果与化学成分研究结果以及与栀子不同饮片的临床功效相一致。

8、通过以上实验建立栀子各饮片的专属、特色质量评价方法，即栀子饮片质量应同时用环烯醚萜苷和二萜色素类成分的指纹图谱以及代表化合物的含量和总量来进行评价。

栀子4种饮片3个部位的HPLC标准指纹图谱有明显差异，可从色谱峰个数及色谱峰面积直观鉴别。

栀子4种30％部位饮片生品、炒黄品、炒焦品的HPLC图谱整体图貌一致，均能检出10，10，9个色谱峰，且京尼平苷和京尼平龙胆双糖苷的峰面积差异不大，炒炭品只检出6个色谱峰，且色谱峰面积下降较大。

栀子4种饮片50％部位生品、炒黄品、炒焦品的HPLC图谱差异不大，均能检出9，9，8个色谱峰，炒焦品与生品相比，Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3以及Crocetin色谱峰面积略有降低，但炒炭品中色谱峰个数和色谱峰面积均大幅减少，仅能检出Crocetin色谱峰。

栀子4种饮片95％部位生品、炒黄品的HPLC图谱差异较小，均能检出18，20个色谱峰，炒焦品可检出25个色谱峰，与生品相比，保留时间15min以前的色谱峰消失殆尽，但Crocetin以及19-25号色谱峰面积较生品增加明显；炒炭品仅能检出Crocetin等2个色谱峰，峰面积高于生品、炒黄品但大大低于炒焦品。

同时栀子各饮片以6种不同主成分组成及其含量测定进行质量评价：

栀子生品、炒黄品测定5个成分(3个色素苷和2个环稀醚萜苷)含量，炒焦品测定4个成分(1个色素苷、1个色素苷元和2个环稀醚萜苷)含量，炒炭品测定3个成分(1个色素苷元和2个环稀醚萜苷)含量，栀子各饮片同时还制定了环烯醚萜苷总量和二萜色素总量标准，详见表1。

表1栀子不同饮片的含量标准(％)

四、该发明与现有技术相比具有以下优势

1.首次在揭示栀子炮制原理的基础上，提出栀子不同饮片的个性特色的质量评价方法，所制定的标准更为科学合理。

2.将传统经验鉴别与“多有效成分定量、指纹图谱定性、结合与其主治、功能相关的药效学研究”的现代科学方法相结合的饮片质量评价模式应用于栀子饮片的质量控制。即以环烯醚萜苷和二萜色素类成分的标准指纹图谱以及代表化合物的含量同时来进行栀子不同饮片的质量评价，与现版栀子药材标准相比，首次以2个环烯醚萜苷和4个二萜色素类同时控制栀子饮片的质量，除京尼平苷外，其余5个成分均为新增指标。

五、具体实施方式

具体研究实验对本发明的进一步说明：

实施例1栀子药材的采集

根据栀子药材的资源分布情况，栀子主要分布于我国长江以南各省，本试验所用药材采购自江西泰和沿溪镇、江西金溪秀谷、浙江淳安枫树岭、湖南浏阳、江西吉安永丰县、浙江省苍南县、福建福鼎市贯岭镇等7个不同产地总共至少10批次样品，药材基源均为茜草科植物栀子Gardeniajasminoides Ellis的干燥成熟果实，实验样品具有广泛的代表性。

实施例2对照品提取、分离、鉴定和纯化

取江西泰和栀子果实粗粉50kg，以95％乙醇渗漉提取，收集渗漉液，减压回收乙醇至浸膏状，以HP-20大空吸附树脂粗分后，各部位洗脱液分别进行硅胶柱色谱及ODS柱色谱分离和纯化。利用化学、光谱(IR，¹H-NMR，¹³C-NMR，¹H-¹H COSY，¹H-¹³C COSY，HMBC，MS)等技术鉴定了其中18个化合物的结构。其中，二萜色素类化合物4个：藏红花酸(crocetin，1)，藏红花酸糖苷-1(crocin 1，2)，藏红花酸糖苷-2(crocin 2，3)和藏红花酸糖苷-3(crocin 3，4)；环烯醚萜类化合物3个：京尼平苷(geniposide，5)，京尼平-1-β-龙胆双糖苷(genipin-1-β-gentiobioside，6)和6″-对香豆酰京尼平龙胆双糖苷(6″-O-P-coumaroyl genipingentiobioside，7)；偶氮类化合物1个：苏丹III(sudanIII，8)，香豆素类化合物2个：欧前胡素(imperatorin，9)和异欧前胡素(isoimperatorin，10)；黄酮类化合物2个：5-羟基-7，3′，4′，5′-四甲氧基黄酮(5-hydroxy-7，3′，4′，5′-tetramethoxyflavone，11)和5-羟基-6，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮(5-hydroxy-6，7，3′，4′，5′-pentamethoxyflavone，12)；色原酮1个：2-甲基-3，5-二羟基色原酮(2-methyl-3，5-dihydroxychromone，13)，蒽醌类1个：大黄素甲醚(physcion，14)；五环三萜类化合物1个：熊果酸(ursolic acid，15)；甾醇类化合物1个：β-谷甾醇(β-stitosterol，16)；卟啉环化合物2个：叶绿素a(achlorophyll a，17)和叶绿素b(achlorophyll b，18)。

实施例3栀子不同饮片的制备

炮制设备：DW-2*8.3型带式干燥机，旋转炒药机(DY-640型，河南省周口制药机械厂)，转盘式切药机(QY1204型)，SF-500型封口机。

栀子饮片制备：按照《中国药典》或《全国中药炮制规范》相关项下的炮制方法，取生栀子分别以果实整粒或碾碎后制备出栀子生品、炒黄品、炒焦品以及炒炭品。

实施例4栀子不同饮片的HPLC指纹图谱鉴别

(1)供试品溶液的制备：精密称取各批次栀子饮片干燥粉末5g(二号筛)，精密称定，放入具塞三角瓶内，分别精密加入甲醇100mL，密塞，超声提取40min，过滤，滤液置水浴上低温蒸干。用约3mL水溶解各样品提取物上预处理好的大孔吸附树脂色谱柱，柱子规格

待样品完全吸附后，先用少量的水洗去水溶性杂质，然后依次用150mL30％乙醇，150mL50％乙醇，150mL95％乙醇洗脱，收集各洗脱液150mL，回收溶剂后，以甲醇定溶于20mL容量瓶中，0.45μm微孔滤膜过滤，取各供试液10μL进样检测。

(2)实验方法：HPLC法，仪器：Agilent 1100全自动四元泵高效液相色谱仪；色谱柱：Kromasil C₁₈(5μm，4.6×250mm)；流动相甲醇-水(0-60min，甲醇15％-25％)，甲醇-水(0-42-60min，甲醇42％-60％-75％)以及甲醇-乙腈-1％甲酸(0-60min，甲醇3％乙腈27％-甲醇7.5％乙腈42.5％)梯度洗脱，检测波长至少分别为238nm，440nm，440nm，流速：1.0ml/min。在此条件下不同部位图谱分离较佳。

(3)方法学考察：对各部位流动相、检测波长以及供试品溶液制备方法(包括提取溶剂、提取方法、提取时间)的基础上开展了HPLC指纹图谱方法学考察，结果各部位相对保留时间和相对峰面积的精密度、稳定性以及重复性实验的RSD＜5％。

(4)测定和分析：以建立的HPLC指纹图谱分析方法，对栀子生品、炒黄品、炒焦品的30％、50％、95％等三个乙醇洗脱部位进行了比较分析，通过10批次不同饮片的测定，确定了不同饮片不同部位的共有峰(见图1-3)。并结合栀子的化学成分研究，对其中的部分色谱峰进行了指认。

由HPLC指纹图谱比较分析结果可以看到，栀子不同饮片30％部位以环烯醚萜苷类成分(Geniposide、Genipin gentiobioside)为主，4种饮片30％部位整体色谱图貌较为接近，栀子炭与生片相比，峰面积降幅较大。

50％部位以Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3等二萜色素类成分含量较高，生品、炒黄品、炒焦品50％部位色谱峰数目没有明显变化，但炒炭品中主要色谱峰大幅减少。

95％部位以Crocin 3以及Crocetin二萜色素类成分为主，生品和炒黄品图谱差别较小，而炒焦品与生品相比，色谱峰个数和峰面积比均有较大差别，较明显的为焦栀子藏红花酸峰面积明显比生栀子和炒栀子的对应峰面积大，而炒炭品中峰面积下降更多，但尚能检测出藏红花酸。

综合以上三个部位分析，以炒炭品50％、95％部位(即色素类成分)的图谱变化最为显著，此与其高温炮制密切相关；同时炒焦品在95％部位色谱图变化明显，以上标准指纹图谱可用于生、焦栀子以及栀子炭的定性鉴别。

实施例5栀子不同饮片中两类主成分含量测定

(1)供试品溶液制备：取栀子不同饮片样品粉末(过三号筛)各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声提取10分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

(2)实验方法：HPLC法，仪器：Agilent 1100全自动四元泵高效液相色谱仪；色谱柱：Kromasil C₁₈(5μm，4.6×250mm)；流动相分别为甲醇-乙腈-1％甲酸梯度洗脱和甲醇-水(12∶88)等度洗脱，检测波长分别为440nm，238nm。在此2个色谱条件下，2类成分均达到基线分离。

测定指标：二萜色素类：Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3和Crocetin(藏红花素酸糖苷-1、2、3和藏红花酸)；环烯醚萜苷类：Genipin gentiobioside(简称GG)、Geniposide；以上化合物纯度均达到98％以上，可供含量分析用。

(3)方法学考察

①色谱条件

②样品提取方法考察

③线性关系考察

④精密度、稳定性、重现性、加样回收率试验

(4)样品测定及分析：对两类成分(环烯醚萜苷类和二萜色素类)6种对照品的含量测定研究表明，栀子生品、炒黄品与炒焦品环烯醚萜苷类成分(京尼平苷、京尼平龙胆二糖苷)的含量变化幅度不大，炒炭品中含量降低约为生品的40％。而二萜色素类成分变化较大，其变化规律有由二萜色素苷向苷元转化的趋势。

炒黄品与生品相比，二萜色素类成分(Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3、Crocetin)的总量有所下降，但色素类成分的组成没有明显的变化。

炒焦品与生品相比，色素类成分的总量下降更为明显，且在组成比例上发生了较大变化，生品、炒黄品中主要含有Crocin 1、Crocin 2，且均以Crocin 1为主；焦栀子中含有Crocetin和Crocin 3，以Crocetin为主。

炒炭品与生品比较，色素类成分总量下降近90％，且色素类成分的组成发生了较大的变化，以Crocetin为主，但含量较焦栀子下降许多。

●Crocin 1：呈现明显的下降趋势，至炒焦品呈快速下降态势，炒炭品中基本检测不到。

●Crocin 2：生品中含量不高，呈缓慢的下降趋势。

●Crocin 3：呈现近似低→高→低的变化过程，总体上以炒黄品中含量最高。

●Crocetin：呈现低→高→低的变化过程，以炒焦品含量最高。

以上研究结果表明，栀子经不同方法炮制后，其不同饮片的成分组成和量比关系发生了明显变化，因此不同饮片应有不同的质控指标和含量标准，与HPLC指纹图谱比较结果一致。

实施例6栀子二萜色素类成分的加热模拟炮制实验

分别取一定量的Crocin 1置烘箱中加热，按设定温度(120、140、160、180、200℃)，每个温度加热后5min取样，依法进样进行HPLC分析；结果Crocin 1随着受热强度的递增，逐步向Crocin 2、Crocin 3、Crocetin转变，与栀子炒焦后HPLC图谱及成分含量变化规律基本一致。说明栀子炒焦、炒炭后，该类成分的变化可能为引起其主治功效的变化的原因之一。

实施例7栀子不同饮片药效学实验研究

1)抗炎试验

生、焦栀子50％、95％乙醇洗脱部位对二甲苯所致小鼠耳廓炎症与溶剂组比较有明显的抑制作用。除生栀子50％部位外，生、焦栀子其它3个部位对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高炎症与溶剂组比较有明显的抑制作用。

2)镇痛作用

栀子、焦栀子的4个乙醇部位对醋酸引起的小鼠疼痛有较明显的镇痛作用，95％部位优于50％部位。藏红花酸大剂量和藏红花酸糖苷-1对醋酸所致的疼痛模型，与对照组相比作用不明显。

3)保肝作用

藏红花糖苷-1和藏红花酸对总胆红素有降低作用(P＜0.05)，而且藏红花酸的作用较强于藏红花糖苷-1(P＜0.05)。

4)对大鼠血液流变学和凝血指标的影响

栀子、焦栀子95％部位对正常大鼠血小板聚集有较明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异。焦栀子95％部位有较好的止血作用，能较明显缩短正常大鼠凝血酶原(PT)时间。

藏红花酸糖苷-1中、大剂量组与藏红花酸各剂量组能明显降低血瘀证大鼠高切变率下的全血黏度，与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05)。

藏红花酸和藏红花酸糖苷-1能不同程度提高血瘀证大鼠的纤维蛋白原(FIB)含量。藏红花酸糖苷-1的中、大剂量和藏红花酸各剂量能明显缩短凝血酶原(PT)时间，藏红花酸大剂量的凝血作用强于藏红酸糖苷-1(P＜0.05)。同时藏红花酸还能明显缩短凝血酶(TT)和部分凝血活酶原(APTT)时间。从凝血机制分析，藏红花酸的凝血作用强于藏红花酸糖苷-1。

5)藏红花酸、藏红花酸糖苷-1的体内代谢研究

A、藏红花酸、藏红花糖苷-1***实验表明，二者均主要通过粪便***。

B、大鼠口服给药藏红花酸，从尿液和粪便中的总排出率为16.88％。大鼠口服藏红花酸糖苷-1总***率为31.33％。大鼠口服藏红花酸比口服藏红花酸糖苷-1的***率小50％。

C、从藏红花酸血浆代谢拟合曲线和各种参数可以看到，藏红花酸在给药后1.92h达最高血药浓度407.06μg·mL-1，在体内的平均滞留时间为3.7±0.44h，无明显蓄积现象。AUCt为1928.822±524.850hμg·mL-1。

D、藏红花糖苷-1经血浆代谢为Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3、Crocetin。

E、藏红花糖苷-1在给药后1h达最高，血药浓度平均为8.3057±0.1798μg/mL；代谢产物藏红花酸在2h达最高血药浓度平均为27.55±6.4079μg/mL；二者的滞留时间分别为4.2361±0.666h和5.153±1.072h，无明显蓄积现象。

F、AUC值能较为准确地反映药物在体内的吸收程度，藏红花酸糖苷-1的AUCt为31.830±2.104hμg/ml，代谢产物藏红花酸的AUCt为181.500±60.035hμg/ml，对比藏红花酸的血浆代谢AUCt为1928.822±524.850hμg/ml，藏红花酸血浆代谢的AUCt远远大于藏红花酸糖苷-1，说明口服藏红花酸比藏红花糖苷-1吸收好。

实施例8栀子不同饮片的质量评价方法

栀子不同饮片以传统方法如外观、颜色、断面、气味等进行鉴别的同时，以上实验结果综合分析，二萜色素类成分在栀子不同饮片中发生了明显变化，呈现出一定的规律性；药效学研究表明该类成分的变化可能与栀子不同饮片的临床功效密切相关，因此将该类4个成分纳入栀子不同饮片的质控标准中。环烯醚萜类成分在原有测定指标京尼平苷的基础上，增加了京尼平龙胆二糖苷的含量标准，从而使栀子饮片的质量评价方法更为科学、合理。

经过多批次以上含量测定，栀子4种饮片中6个成分的组成和含量标准见表2，由于上述成分在普通意义上均不算毒性成分，因此，可以其下限为其含量标准。除以上4种饮片外，其它来源于栀子的饮片如姜栀子等也可以该方法进行质量评价。

表1栀子不同饮片中6个成分的含量范围(含量％)

实施例9栀子不同饮片质量评价指标及其类似结构的化合物

1、环烯醚萜类成分：栀子中富含该类成分，本方法纳入了京尼平苷(genipoide)，京尼平1-β-龙胆苷(genipin-1-β-gentiobioside)的指标，而栀子中同类其它成分如6′-香豆酰京尼平龙胆双糖苷(6′-o-p-coumaroly gentiobioside)、羟基栀子苷(gardenoside)、山栀子苷(shazhiside)、栀子酮苷(gardosede)、栀子酸(geniposidic acid)、车叶草苷(asperuloside)、去乙酰车叶草苷酸甲酯(deacetylasperulosidic acid methyl ester)、鸡矢藤次苷甲酯(scandoside methyl ester)、10-乙酰京尼平苷(10-acetyl geniposide)等或以不同取代基如羟基、乙酰基、酯基或糖基等取代，如果这些成分在HPLC指纹图谱上或能够检测到含量，预计与其它成分同时可作为栀子不同饮片的评价指标。

2、二萜色素类成分：是栀子色素类成分组成部分，也是栀子药效成分之一，本方法中纳入了Crocin 1、Crocin 2、Crocin 3以及Crocetin等4个指标，预计与该类成分类似结构的以不同取代基取代(如羟基、乙酰基、酯基或糖基等取代，糖与母核基团成氧苷，不仅限于单糖苷，可为单糖苷以上；不仅限于单糖链，可为单糖链以上；亦不仅限于葡萄糖)的其它化合物，如果这些成分在HPLC指纹图谱上或能够检测到含量，预计与其它成分同时可作为栀子不同饮片的评价指标。

Crocin 1：R1＝R2＝龙胆双糖

Crocin 2：R1＝龙胆二糖，R2＝葡萄糖

Crocin 3：R1＝H，R2＝龙胆二糖

Crocetin：R1＝R2＝H

3、其它成分：栀子果实中除以上化学成分外，还含有黄酮类化合物如栀子素，栀子素B、C、D、E等，有机酸酯如绿原酸，3，4-二咖啡酰-5-(3-羟基-3-甲基戊二酰)奎尼酸，3，4-二氧-咖啡酰奎尼酸，3-氧-咖啡酰-4-氧-芥子酰奎尼酸等，此外还含有三萜、多糖、挥发油等成分。这些成分及其类似物在栀子饮片HPLC指纹图谱上或能够检测到含量，预计与其它成分同时可作为栀子不同饮片的评价指标。

4、因此，栀子不同饮片的质量评价方法，不仅限于本方法中的测定指标，预计任何来源于栀子饮片中的成分且能够检测到或能够定量，均可用于栀子饮片的质控指标。

实施例10栀子药材及含栀子制剂的质量评价

栀子饮片来源于栀子药材，因此该评价方法中不同的成分指标及其含量标准可用于栀子药材的资源、种植、育苗、采收加工、鉴定、栀子提取物以及含栀子复方制剂的原料、中间体以及成品的质量控制。

六、附图说明

1.图1 4种栀子饮片30％部位HPLC标准指纹图谱比较

2.图2 4种栀子饮片50％部位HPLC标准指纹图谱比较

3.图3 4种栀子饮片95％部位HPLC标准指纹图谱比较

Claims

1.一种用于栀子不同饮片的质量评价方法，其特征在于：在初步阐明栀子炮制原理的基础上，利用HPLC指纹图谱和多指标定量以及药效研究综合评价栀子饮片的质量，针对栀子不同饮片制定了具有个性特色的、专属性的质量评价方法。

2.根据权利要求1中所述，栀子饮片可以为来源于栀子的所有饮片。

3.根据权利要求1所述，HPLC指纹图谱至少分3个部位进行，可以是30％、50％以及95％部位，也可以采用其它不同比例部位，但各部位能明确区分栀子不同饮片。

4.根据权利要求1所述，质控指标为从栀子中提取分离得到的2个环烯醚萜和4个二萜色素类成分，不仅限于此6个成分，纯度达到含量测定要求，该2类成分可任意组合。

5.根据权利要求4所述，质控指标可以是环烯醚萜和和二萜色素类成分的同系物，或从栀子中分离得到的其它能达到含量测定的成分。

6.根据权利要求4和权利要求5所述，质控指标至少为环烯醚萜和二萜色素两类成分，也可以与其它成分任意组合综合评价栀子饮片质量。

7.根据权利要求1和权利要求6所述，该评价方法中不同的成分指标及其含量标准可用于栀子饮片生产工艺控制指标，或栀子药材的资源、种植、育苗、采收加工、鉴定、栀子提取物以及含栀子复方制剂的原料、中间体以及成品的质量控制。