CN102293805A - 一种抱茎苦荬菜总酚酸及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,包括下述工艺步骤:将抱茎苦荬菜药材粉碎后加入0.1%~0.5%碳酸氢钠溶液作溶剂进行渗漉,收集5~15倍量的渗漉液,用稀硫酸调节pH值至2~3,滤过,沉淀备用;滤液通过聚酰胺柱,先用1~5倍量水洗去杂质,继用90%乙醇洗脱,收集5~15倍量乙醇洗脱液,备用;上述沉淀用2~10倍量90%乙醇提取3次,滤过,滤液与上述乙醇液合并,40~70℃回收乙醇,减压浓缩,加4%氢氧化钠溶液使溶解,滤过,干燥,即得。本发明方法制得的抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂克服了酚酸类化合物在制备和储存过程中易分解变质的缺陷,保证了有效成分的稳定性,从而确保了抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂的质量和疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种抱茎苦荬菜总酚酸及其制备方法,本发明还涉及含该抱茎苦荬菜总酚酸的冻干粉针及其制备方法和质量控制方法,属于药学领域。
背景技术
抱茎苦荬菜,俗称苦碟子、满天星等,为菊科苦荬菜属抱茎苦荬菜[Ixeris sonchifolia (Bge)Hance] 的两年生干燥地上部分,具有清热解毒,化瘀止痛的功效,临床应用以苦碟子注射液较为广泛。苦碟子注射液由抱茎苦荬菜单味药制成,主要成分有黄酮、酚酸、腺苷、氨基酸等,用于治疗冠心病、心绞痛及心肌梗死等缺血性心脑血管疾病。近几年对该药物的研究有很大进展,但多集中于黄酮类化合物,对另一有效部位总酚酸类化合物的单独研究未见报道。
发明内容
本发明的目的,是提供一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法。
本发明的另一目的是提供该抱茎苦荬菜总酚酸冻干粉针剂的制备方法和冻干针剂的质量控制方法。
采用的技术方案是:
一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,包括下述工艺步骤:
1、将抱茎苦荬菜药材粉碎后加入0.1%-0.5%的碳酸氢钠溶液作溶剂进行渗漉,收集10-15倍量的渗漉液,用稀硫酸调节pH值至2-3,滤过,沉淀备用;
2、将步骤一获得的滤液通过聚酰胺柱,先用1-5倍量水洗去杂质,继用90%乙醇洗脱,收集5-15倍量乙醇洗脱液,备用;
3、将步骤一获得的沉淀用2-10倍量90%乙醇提取3次,滤过,滤液与步骤二所得乙醇液合并,40-70℃回收乙醇,减压浓缩,加4%氢氧化钠溶液使溶解,滤过,干燥,即得抱茎苦荬菜总酚酸。
本发明采用弱碱渗漉初提,过聚酰胺柱除杂,高浓度乙醇精提的方法,即采用低浓度弱碱将酸性较强的成分如酚酸、鞣质等有选择性地提取出来,研究中,对不同浓度的碳酸钠和碳酸氢钠作为提取溶剂分别进行了比较,结果表明,以0.2%-0.5%的碳酸氢钠作为溶剂提取效率最高且所含杂质最少;为了维持抱茎苦荬菜酚酸类化合物的稳定,避免酚酸类成分在高温下发生氧化降解,采用渗漉法进行提取;由于碱提取可能会带入鞣质类杂质,而鞣质在聚酰胺柱上吸附性很强,需用强碱才能洗去,故用90%乙醇对聚酰胺柱进行洗脱,便在将有效成分洗脱下来的同时将鞣质除去;最后采用高浓度醇将游离的总酚酸精制出来。本法所得最终提取物中抱茎苦荬菜总酚酸的含量高,杂质少,其总酚酸含量在80%以上,生理活性强,且工艺过程简单易行、安全可控,为所得抱茎苦荬菜总酚酸应用于各种制剂奠定了基础。
利用本发明方法得到的抱茎苦荬菜总酚酸可以用来制备任何一种药剂学上所说的制剂。例如,用于口服时,可以制成相应的片剂,颗粒剂或胶囊剂等形式;还可以制成粉针剂、注射用的溶液等形式。
本发明还涉及抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂的制备方法,其技术要点是取抱茎苦荬菜总酚酸,加入适量注射用水使溶解,用10%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0,加入支撑剂甘露醇,加入量以重量比计抱茎苦荬菜总酚酸比甘露醇为1:0.1-1,再加入保护剂硫代硫酸钠,加入量以重量百分比计为0.1-1%,以及适量的注射用水,每1000ml溶液中加入5g活性炭,调节pH值至7.0,加热至沸并保持微沸15分钟,冷却,滤过,灭菌,滤过,灌装,冷冻干燥,压盖,即得。
以本发明方法制得的抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂克服了酚酸类化合物在制备和储存过程中易分解变质的缺陷,保证了有效成分的稳定性,从而确保了抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂的质量和疗效。
具体实施方式
实施例一
一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,包括下述工艺步骤:
1、将抱茎苦荬菜药材粉碎成10cm长的小段后加入0.5%碳酸氢钠溶液作溶剂进行渗漉,收集10倍量的渗漉液,用稀硫酸调节pH值至2.0,滤过,沉淀备用;
2、将步骤一获得的滤液通过聚酰胺柱,先用5倍量水洗去杂质,继用90%乙醇洗脱,收集8倍量乙醇洗脱液,备用;
3、将步骤一获得的沉淀用5倍量90%乙醇提取3次,滤过,滤液与步骤二所得乙醇液合并,50℃回收乙醇,减压浓缩,加4%氢氧化钠溶液使溶解,滤过,干燥,即得抱茎苦荬菜总酚酸108g。
实施例二
一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,包括下述工艺步骤:
1、将抱茎苦荬菜药材粉碎成12cm长的小段后加入0.3%碳酸氢钠溶液作溶剂进行渗漉,收集12倍量的渗漉液,用稀硫酸调节pH值至2.5,滤过,沉淀备用;
2、将步骤一获得的滤液通过聚酰胺柱,先用8倍量水洗去杂质,继用90%乙醇洗脱,收集10倍量乙醇洗脱液,备用;
3、将步骤一获得的沉淀用8倍量90%乙醇提取3次,滤过,滤液与步骤二所得乙醇液合并,55℃回收乙醇,减压浓缩,加4%氢氧化钠溶液使溶解,滤过,干燥,即得抱茎苦荬菜总酚酸113g。
实施例三
一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,包括下述工艺步骤:
1、将抱茎苦荬菜药材粉碎成15cm长的小段后加入0.2%碳酸氢钠溶液作溶剂进行渗漉,收集15倍量的渗漉液,用稀硫酸调节pH值至3,滤过,沉淀备用;
2、将步骤一获得的滤液通过聚酰胺柱,先用10倍量水洗去杂质,继用90%乙醇洗脱,收集15倍量乙醇洗脱液,备用;
3、将步骤一获得的沉淀用10倍量90%乙醇提取3次,滤过,滤液与步骤二所得乙醇液合并,60℃回收乙醇,减压浓缩,加4%氢氧化钠溶液使溶解,滤过,干燥,即得抱茎苦荬菜总酚酸115g。
实施例四
一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,包括下述工艺步骤:
取抱茎苦荬菜总酚酸20g,加入适量注射用水使溶解,用10%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0,加入支撑剂甘露醇4g,再加入保护剂硫代硫酸钠0.1g,以及适量的注射用水,每1000ml溶液中加入5g活性炭,调节pH值至7.0,加热至沸并保持微沸15分钟,冷却,滤过,灭菌,滤过,灌装,冷冻干燥,压盖,即可得到1000支注射用冻干粉。
抱茎苦荬菜注射用冻干粉针中总酚酸的含量测定方法
本发明采用紫外分光光度法对总酚酸进行含量测定,经方法学验证该方法准确可靠、简便易行。分别以咖啡酸、菊苣酸和蒲公英素B为对照品进行考察,结果蒲公英素B的最大吸收波长与供试品溶液相一致且含量最高,故选用蒲公英素B为对照品。在线性关系考察中发现,标准曲线经过原点,故采用对照品比较法作为含量计算方法。具体方法如下:
对照品溶液的制备
取蒲公英素B对照品约8mg,精密称定,置10ml量瓶中,加50%乙醇至刻度,摇匀;精密量取1ml,置100ml量瓶,加50%乙醇至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备取本品10mg,精密称定,加水5ml使溶解,通过15g已处理好的AB-8型大孔树脂柱,以水洗脱,100ml量瓶收集洗脱液至刻度,摇匀,精密量取1ml,至10ml量瓶中,加入无水乙醇5ml,再加水至刻度,摇匀,即得。
测定法
分别取对照品溶液与供试品溶液,在328nm波长处测定吸光度,按对照品比较法计算样品含量。
抱茎苦荬菜注射用冻干粉针中蒲公英素B的含量测定方法
为进一步控制产品质量,本发明采用高效液相色谱法对总酚酸中含量最高的蒲公英素B进行含量测定。
色谱条件与***适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.4%磷酸溶液(20:80)为流动相;检测波长为328nm;理论板数以蒲公英素B峰记算应不低于5000;
对照品溶液的制备 精密称取蒲公英素B对照品适量,加50%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液制备 取本品50mg,精密称定,置100ml量瓶中,加入50%乙醇至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
抱茎苦荬菜总酚酸的药效学试验及毒性试验
利用本发明方法制得的抱茎苦荬菜总酚酸不但质量稳定,而且富含中药抱茎苦荬菜的活性成分,具有优异的抗血细胞聚集、抗心肌缺血、缺氧等药理作用,因此可以用来制备疗效好,安全可靠的防治心脑血管疾病的药物。以下抱茎苦荬菜总酚酸的药效学试验充分证明了抱茎苦荬菜总酚酸及其粉针剂具有良好的药理作用。
实验例1 抱茎苦荬菜总酚酸和抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂对大鼠血瘀证模型血细胞聚集作用的影响
采用反复注射肾上腺素和施以冰水浸泡的方法制作急性血瘀证大鼠模型,以全血粘度和红细胞聚集指数等指标,以比浊法测定血小板最大聚集率,结果如下。
(1)对大鼠急性血瘀模型全血粘度的影响
急性血瘀模型组与正常对照组比较其全血高、中、低切黏度值均明显升高,表明模型大鼠的血液流变学状态出现异常改变,提示大鼠急性血瘀证造模成功。结果如表4所示,采用实施例1得到的抱茎苦荬菜总酚酸10、20mg/kg,实施例4得到的抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5、27mg/kg,均可明显降低急性血瘀大鼠的全血黏度值,与模型组比较,有显著差异,表明有明显改善急性血瘀模型大鼠全血黏度的作用。抱茎苦荬菜总酚酸10mg/kg、抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5mg/kg与苦碟子注射液1g/kg作用相当。
表1 对急性血瘀模型大鼠全血粘度的影响(x±s,n=6)
组别 | 剂量(mg/kg) | 高切 | 中切 | 低切 |
对照组 | 6.91 ±0.82 | 8.41 ±0.74 | 17.75 ±3.34 | |
模型组 | 9.09 ±1.28 | 11.29 ±1.60 | 21.91 ±1.89 | |
ZFS | 10 | 7.21 ±1.10* | 8.61 ±1.24* | 18.16 ±2.24* |
20 | 6.72 ±0.99* | 7.76 ±1.18* | 15.64 ±2.09* | |
ZFSFJ | 12 | 7.15 ±0.96* | 8.47 ±1.16* | 18.95 ±2.59* |
24 | 6.63 ±1.03* | 7.97 ±1.07* | 15.16 ±2.03* | |
KDZ | 1000 | 7.03 ±1.15* | 8.19 ±1.08* | 17.26 ±2.15* |
注:与模型组比较,*P < 0.01;
(2)对大鼠急性血瘀模型红细胞聚集的影响
血瘀证模型组的红细胞电泳时间与正常对照组比较明显延长,其他指标如红细胞聚集指数、红细胞变形指数、刚性指数、红细胞压积分别与对照组比较均有一定的升高趋势。采用抱茎苦荬菜总酚酸10、20mg/kg,抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5、27mg/kg,对血瘀证大鼠异常升高的红细胞聚集指数、红细胞变形指数和刚性指数均具有显著的降低作用,与模型组比较,有显著差异。抱茎苦荬菜总酚酸10mg/kg、抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5mg/kg与苦碟子注射液1g/kg作用相当。
表2 对大鼠急性血瘀模型的红细胞聚集的影响(x±s,n=6)
组别 | 剂量(mg/kg) | 红细胞聚集指数 | 红细胞变形指数 | 刚性指数 | 红细胞压积 |
对照组 | 12.64 ±3.18 | 0.92 ±0.05 | 7.55±1.86 | 0.50 ±0.02 | |
模型组 | 13.07 ±2.53 | 0.99 ±0.14 | 8.66 ±2.17 | 0.52 ±0.05 | |
ZFS | 10 | 11.34 ±2.15* | 0.86 ±0.11 | 6.68 ±1.35* | 0.50 ±0.04 |
20 | 8.92 ±1.56** | 0.81 ±0.15* | 5.55 ±1.42* | 0.52 ±0.04 | |
ZFSFJ | 12 | 11.57 ±2.24* | 0.87 ±0.17 | 6.75 ±1.29* | 0.50 ±0.04 |
24 | 9.04 ±1.65** | 0.80 ±0.09* | 5.63 ±1.45* | 0.52 ±0.04 | |
KDZ | 1000 | 10.91 ±1.92* | 0.85 ±0.18 | 6.62 ±1.34* | 0.50 ±0.04 |
注:与模型组比较,**P < 0.01,*P < 0.05
(3)对大鼠急性血瘀模型血小板聚集功能的影响
急性血瘀模型组的血小板最大聚集率与正常对照组比较,其升高作用具有统计学意义。采用抱茎苦荬菜总酚酸10、20mg/kg,抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5、27mg/kg,均可显著降低急性血瘀模型大鼠的血小板最大聚集率, 与模型组比较,有显著差异。提示抱茎苦荬菜总酚酸和抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂对急性血瘀证异常增高的血小板聚集功能具有明显的防治作用。抱茎苦荬菜总酚酸10mg/kg、抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5mg/kg与苦碟子注射液1g/kg作用相当。见表3。
表3 对急性血瘀模型大鼠血小板聚集的影响(x±s, n=6)
组别 | 剂量(mg/kg) | 血小板最大聚集率 | 血小板聚集抑制率(% ) |
对照组 | 19.25 ±9.14 | ||
模型组 | 41.14 ±15.64 | ||
ZFS | 10 | 24.05 ±9.81* | 44.54 |
20 | 20.04 ±8.64* | 51.29 | |
ZFSFJ | 12 | 23.96 ±9.08* | 44.76 |
24 | 20.17 ±8.42* | 50.97 | |
KDZ | 1000 | 23.08 ±9.41* | 43.90 |
注:与模型组比较, *P < 0.05
实验例2 抱茎苦荬菜总酚酸和抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂对小鼠心肌营养性血流量的影响
以小鼠心肌摄取86Rb能力大小为指标,观察抱茎苦荬菜总酚酸(ZFS)和抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂(ZFSFJ)对心肌营养性血流量的影响。在一定条件下,心肌血流量越大,其摄取量也越大,血流量与心肌对86Rb的摄取量成正比关系。故小鼠心肌对86Rb的摄取能力的大小,可以反映整体条件下小鼠心肌血流量的变化。
如表4所示,采用抱茎苦荬菜总酚酸10、20mg/kg,抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5、27mg/kg,可显著增加心肌摄取86Rb作用,与对照组比较,有显著差异。表明总酚酸及其粉针剂均可显著增加心肌营养血流量,改善由于心肌缺血引起的心绞痛等症状。抱茎苦荬菜总酚酸20mg/kg、抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂27mg/kg与苦碟子注射液1g/kg作用相当。
表4 对小鼠心肌营养性血流量的影响(n=10)
组别 | 剂量(mg/kg) | 心肌摄取率(%) | 增减百分率(%) |
对照组 | 2.29 | ||
ZFS | 10 | 2.63* | 14.85 |
20 | 2.80** | 22.27 | |
ZFSFJ | 12 | 2.61* | 13.97 |
24 | 2.78** | 21.40 | |
KDZ | 1000 | 2.79** | 21.83 |
注:与模型组比较,**P < 0.01,*P < 0.05
实验例3 抱茎苦荬菜总酚酸和抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂对异丙肾上腺素增加心肌耗氧量的影响
如表5所示,采用抱茎苦荬菜总酚酸10、20mg/kg,抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5、27mg/kg,可明显对抗异丙肾上腺素增加心肌耗氧量的作用。与模型组比较,有显著差异。提示抱茎苦荬菜总酚酸和抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂对心肌缺氧具有明显的保护作用。抱茎苦荬菜总酚酸10mg/kg、抱茎苦荬菜总酚酸粉针剂13.5mg/kg与苦碟子注射液1g/kg作用相当。
表5 对异丙肾上腺素增加心肌耗氧量的影响(n=10)
组别 | 剂量(mg/kg) | 耗氧率(L/h*m2体表) | 增减百分率(%) |
对照组 | 41.54 ±12.58 | ||
模型组 | 52.25 ±18.64 | ||
ZFS | 10 | 40.25 ±10.51* | -22.97 |
20 | 32.55 ±9.48** | -37.70 | |
ZFSFJ | 12 | 40.94 ±11.08* | -21.65 |
24 | 31.95 ±10.24** | -38.85 | |
KDZ | 1000 | 39.25 ±10.51* | -24.88 |
注:与模型组比较,**P < 0.01,*P < 0.05
实验例4 抱茎苦荬菜总酚酸的毒性实验
急性毒性:小鼠静脉注射半数致死量(LD50)为2171.62mg/kg;腹腔注射半数致死量(LD50)为2150.25mg/kg。大鼠和狗的长期毒性安全剂量分别为80mg/kg和50mg/kg。可见抱茎苦荬菜总酚酸的毒性很小。
Claims (4)
1.一种抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,其特征在于包括下述工艺步骤:
将抱茎苦荬菜药材粉碎后加入0.1%~0.5%碳酸氢钠溶液作溶剂进行渗漉,收集5~15倍量的渗漉液,用稀硫酸调节pH值至2~3,滤过,沉淀备用;滤液通过聚酰胺柱,先用1~5倍量水洗去杂质,继用90%乙醇洗脱,收集5~15倍量乙醇洗脱液,备用;上述沉淀用2~10倍量90%乙醇提取3次,滤过,滤液与上述乙醇液合并,40~70℃回收乙醇,减压浓缩,加4%氢氧化钠溶液使溶解,滤过,干燥,即得抱茎苦荬菜总酚酸;抱茎苦荬菜总酚酸以重量百分比计不少于16%。
2.根据权利要求1所述的抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,其特征在于制备成的抱茎苦荬菜总酚酸能制成注射用冻干粉针,含抱茎苦荬菜总酚酸不少于80%。
3.根据权利要求2所述抱茎苦荬菜总酚酸的注射用冻干粉针,其特征在于制备方法包括下列步骤:
取抱茎苦荬菜总酚酸,加入适量注射用水使溶解,用10%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0,加入支撑剂甘露醇,加入量以重量比计抱茎苦荬菜总酚酸比甘露醇为1:0.1-1,再加入保护剂硫代硫酸钠,加入量以重量百分比计为0.1-1%,以及适量的注射用水,每1000ml溶液中加入5g活性炭,调节pH值至7.0,加热至沸并保持15分钟,冷却,滤过,灭菌,滤过,灌装,冷冻干燥,压盖,即得。
4.根据权利要求2所述的抱茎苦荬菜总酚酸的制备方法,其特征在于制备成的注射用冻干粉针的总酚酸测定方法,包括下述工艺步骤:
a.对照品溶液的制备
取蒲公英素B对照品8mg,精密称定,置10ml量瓶中,加50%乙醇至刻度,摇匀;精密量取1ml,置100ml量瓶,加50%乙醇至刻度,摇匀,即得;
b.供试品溶液的制备
取本品10mg,精密称定,加水5ml使溶解,通过15g已处理好的AB-8型大孔树脂柱,以水洗脱,100ml量瓶收集洗脱液至刻度,摇匀,精密量取1ml,至10ml量瓶中,加入无水乙醇5ml,再加水至刻度,摇匀,即得;
c.测定法
分别取对照品溶液与供试品溶液,在328nm波长处测定吸光度,按对照品比较法计算样品含量。
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2011
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