CN102284021B - 一种小儿宣肺止咳颗粒组合物及其制备方法和质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种小儿宣肺止咳颗粒组合物及其制备方法和质量控制方法，该组合物是由麻黄、竹叶防风、西南黄芩、桔梗、芥子、苦杏仁、葶苈子、马兰、黄芪、山药、山楂、甘草共十二味中药制备而成；该药具有宣肺解表，清热化痰的功效；主要用于小儿外感咳嗽，痰热壅肺所致的咳嗽痰多、痰黄粘稠、咳痰不爽。其临床药效学试验效果显著，生物利用度高，且无任何毒副作用。

Description

一种小儿宣肺止咳颗粒组合物及其制备方法和质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种小儿宣肺止咳颗粒组合物及其制备方法和质量控制方法，属于制药技术领域。 

技术背景

小儿感冒属临床中比较常见和多发的一种疾病，由于小儿体质虚弱，易患感冒，临床主要表现为发热、咳嗽、鼻塞等症。目前药物治疗主要为西医治疗和中医治疗；西医治疗主要以抗生素、非甾体抗炎药、抗组胺药为主，这些药品副作用较常见，有的还有严重的不良反应，机体易产生耐受性，对小儿的健康很不利。中医在治疗小儿感冒方面，主要以中成药为主，目前市场上大多数治疗效果不能令人满意，不能满足临床需要。 

目前现有技术，中国专利公开了(公开号为：CN 1094629A)一种“小儿益气解毒冲剂及制备方法”的处方及工艺，本发明人经过多年的研究，发现用其工艺制得的制剂存在：疗效不理想，治愈率低，易复发；工艺较粗，稳定性差，有效成分含量低，易吸潮变质等缺陷。 

为解决上述现有技术所存在的缺陷，在近几年的时间里，我们通过发掘祖国丰富的中医药资源，结合大量的临床药效学研究，发明了一种小儿宣肺止咳颗粒组合物，本产品“小儿宣肺止咳颗粒”是在其(公开号为：CN 1094629A)工艺的基础上，通过大量的实验摸索，发现将其工艺中的水提改成90℃水温浸后，有效成分的提取率显著提高，我们并对麻黄的醇提浓度及水提部分的醇沉浓度进行了研究，发现麻黄用80％乙醇回流提取比用70％乙醇提取效果好，60％乙醇醇沉比用70％乙醇醇沉效果好；我们按照新工艺制成了颗粒剂，与按照中国专利公开的(公开号为：CN 1094629A)一种“小儿益气解毒冲剂及制备方法”的处方及工艺制备而成的冲剂相比，其临床药效学实验效果显著提高，工艺更加合理，药物有效成分含量高，安全无毒副作用。 

发明内容

本发明的目的在于：提供一种工艺先进，疗效更为显著的小儿宣肺止咳颗粒组合物及其制备方法和质量控制方法。 

本发明小儿宣肺止咳颗粒组合物，其配方组成如下： 

麻黄105g     竹叶防风210g    西南黄芩210g 

桔梗105g     芥子105g        苦杏仁105g 

葶苈子105g   马兰210g        黄芪210g 

山药105g     山楂210g        甘草105g； 

本发明小儿宣肺止咳颗粒组合物的制备方法如下： 

以上十二味，麻黄粉碎，加80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，加醇量分别为5、4、3倍，合并醇提液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.08(80～85℃)，备用；其余十一味粉碎，加90℃水温浸三次，每次1小时，加水量分别为8、6、6倍，合并温浸液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(80～85℃)，待冷至室温，加入乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置24小时，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.21(80～85℃)，与上述麻黄稠膏混合，继续浓缩至相对密度为1.31(80～85℃)，加蔗糖、糊精适量，制成颗粒，干燥，制成1000g，分装，即得。 

为了有效控制本发明产品的质量，发明人还制定了其质量控制方法，包括含量测定部分和定性鉴别部分。 

定量方法如下： 

含量测定： 

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥD)测定。 

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH3.5，精密称取干燥至恒重的磷酸二氢钾细粉6.8050g，置1000ml量瓶中，用适量水溶解并稀释至近刻度，加磷酸0.5ml，加水至刻度，摇匀，置冰箱中保存，备用)(24∶76)为流动相：检测波长为275nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于7000。 

对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量，加50％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 

供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取0.5g，精密称定，精密加入50％乙醇25ml，超声处理(功率250W，频率20kHz)20分钟，滤过，取续滤液，即得。 

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含西南黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于16mg。 

定性鉴别方法可以包含以下中的一种或全部： 

(1)取本品30g，研细，加醋酸乙酯40ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取白芥子对照药材、南葶苈子对照药材各2g，分别加石油醚(60～90℃)20ml，超声处理1小时，倾去石油醚液，药渣加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为 粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与南葶苈子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5～7分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与白芥子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(2)取本品20g，研细，加浓氨试液10ml，放置2小时，加氯仿40ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加盐酸乙醇溶液(1→20)20ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(4∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热约10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(3)取山楂对照药材0.5g，加醋酸乙酯10ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。吸取鉴别(1)项下供试品溶液及上述对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5～10分钟，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下，显相同颜色的斑点；紫外光灯下，显相同颜色的荧光斑点。 

(4)取本品15g，研细，加水100ml，超声处理5分钟，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次30ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，离心，取上清液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下，显相同颜色的斑点；紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。 

本发明小儿宣肺止咳颗粒组合物的功能主治为：宣肺解表，清热化痰。用于小儿外感咳嗽，痰热壅肺所致的咳嗽痰多、痰黄粘稠、咳痰不爽。 

本发明小儿宣肺止咳颗粒组合物的制备方法是经过深入的研究和筛选试验得来的。中国专利(公开号为：CN 1094629A)的制备方法我们定为原工艺，方便以下试验研究。 

1、水提工艺参数的研究 

原工艺水提工艺为：其余十一味药粉碎，加水煎煮多次，煎煮液过滤，合并煎液，浓缩至相对密度为1.00-1.10，冷至室温，加等量70％乙醇充分搅拌均匀，静置，取上清液回收乙醇，继续浓缩至相对密度为1.10-1.30的浸膏。 

原制备方法中明确了其余十一味药材为水煎煮多次，经过我们大量的研究发现，水煎煮由于温度过高，有效成分的提取很低，从而使得药效大大降低，为寻找一种更好的工艺，我们对原水提工艺进行了考察。 

1.1考察方法：以浓缩液中的甘草酸及黄芩苷的含量为指标，筛选水提工艺的温度。 

1.2样品溶液的制备： 

①原水提工艺样品制备：我们取中国专利(公开号为：CN 1094629A)公开处方各药材用量的低点，并给低点同时除以1.91，方便对比；具体为：取原水提工艺1个处方量的竹叶防风209.4g、西南黄芩209.4g、桔梗104.7g、白芥子104.7g、杏仁104.7g、葶苈子104.7g、马兰209.4g、黄芪209.4g、山药107.3g、山楂209.4g、甘草104.7g共十一味药材粉碎，加水煎煮二次，煎煮液过滤，合并煎液，浓缩至相对密度为1.00-1.10，冷至室温，加等量70％乙醇充分搅拌均匀，静置，取上清液回收乙醇，浓缩至1000ml，定为0号。 

②本发明小儿宣肺止咳颗粒组合物水提工艺的制备：分别取本发明小儿宣肺止咳颗粒水提工艺4个处方量的竹叶防风210g、西南黄芩210g、桔梗105g、芥子105g、苦杏仁105g、葶苈子105g、马兰210g、黄芪210g、山药105g、山楂210g、甘草105g共十一味药材粉碎，分别定为1号，2号，3号，4号；1号用95℃的水温浸，2号用90℃的水温浸，3号用85℃的水温浸，4号用80℃的水温浸；1号，2号，3号，4号分别温浸三次，每次1小时，加水量分别为8、6、6倍，合并温浸液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(80～85℃)，待冷至室温，加入乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置24小时，取上清液回收乙醇，分别浓缩至1000ml；得1号浓缩液1000ml，2号浓缩液1000ml，3号浓缩液1000ml，4号浓缩液1000ml。 

1.3检验指标：浓缩液中甘草酸及黄芩苷的含量 

1.4检验方法： 

①样品中甘草酸的含量测定 

色谱条件与***适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(67∶33∶1)为流动相；检测波长为250nm.理论板数按甘草酸峰计算应不低于2000. 

对照品溶液的制备 取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg折合甘草酸0.1959mg)。 

供试品溶液的制备 分别精密量取0号，1号，2号，3号，4号样品各20ml，分别置50ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理(功率250w，频率20kHz)30分钟，取出，放冷，加流动相至刻 度，摇匀，滤过，取续滤液，即得0号，1号，2号，3号，4号样品溶液。 

测定方法 分别精密吸取对照品溶液与0号、1号、2号、3号、4号样品溶液各10μl.注入液相色谱仪测定，即得。

②样品中黄芩苷的含量测定 

色谱条件与***适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH3.5，精密称取干燥至恒重的磷酸二氢钾细粉6.8050g，置1000ml量瓶中，用适量水溶解并稀释至近刻度，加磷酸0.5ml，加水至刻度，摇匀，置冰箱中保存，备用)(24∶76)为流动相：检测波长为275nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于7000。 

对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量，加50％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 

供试品溶液的制备 分别精密量取0号，1号，2号，3号，4号样品各1ml，分别置50ml容量瓶中，分别精密加入50％乙醇适量，超声处理(功率250W，频率20kHz)20分钟，取出，放冷，加50％乙醇至刻度，滤过，取续滤液，即得0号，1号，2号，3号，4号样品溶液。 

测定法 分别精密吸取对照品溶液与0号、1号、2号、3号、4号样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

1.5考察结果，见下表1。 

表1 水提工艺的考察 

结论：本发明制剂将原水煎工艺改为用90℃水温浸后，其有效成分更有利于提出。 

稳定性实验 

(一)实验材料： 

1.药品： 

①本发明小儿宣肺止咳颗粒A：按照本发明实施例1的方法制备，实验时用生理盐水配至所需浓度。 

②原工艺制备的冲剂B：我们取中国专利(公开号为：CN 1094629A)公开处方各药材用量的低点，并给低点同时除以1.91，方便对比，具体制备方法如下： 

处方： 

麻黄107.3g      竹叶防风209.4g    西南黄芩209.4g 

桔梗104.7g      白芥子104.7g      杏仁104.7g 

葶苈子104.7g    马兰209.4g        黄芪209.4g 

山药107.3g      山楂209.4g        甘草104.7g 

工艺：一、取麻黄粉碎，用70％乙醇回流提取二次，合并醇提液；二、其余十一味药粉碎，加水煎煮二次，煎煮液过滤，合并煎液，浓缩至相对密度为1.00-1.10，冷至室温，加等量70％乙醇充分搅拌均匀，静置，取上清液回收乙醇，继续浓缩至相对密度为1.10-1.30的浸膏；三、取步骤二所得浸膏，按1∶1.5-3∶1.5-3的比例加入蔗糖、糊精，与步骤一所得麻黄醇提液混匀、干燥、成型、包装，既得冲剂B。 

2.动物：日本大耳白兔。 

(二)、方法与结果： 

1、试验方法：将以上样品放置于4-6℃、20-25℃、35-38℃的恒温箱中，按照静置时间定期检查稳定性指标，其结果观察的判断标准如下：

0无沉淀  1无浑浊  2微浊  3浑浊  4沉淀 

2.试验结果：试验结果见表2 

表2 稳定性试验 

3.试验结论：通过该试验结果可知，本发明小儿宣肺止咳颗粒A无浑浊、沉淀产生；原工艺制备的冲剂B有浑浊、沉淀产生。 

(三)、小结：通过稳定性考察试验表明：在相同的条件下，本发明小儿宣肺止咳颗粒A比原工艺制备的冲剂B稳定。 

本发明水份测定实验： 

本发明小儿宣肺止咳颗粒(按照本发明实施例1的方法制备)常规条件下放置30个月，并分别于3、6、9、12、18、24、30个月时测其水份含量，结果如下表3。 

表3 本发明小儿宣肺止咳颗粒水份测定试验 

根据检测结果，本发明小儿宣肺止咳颗粒在30个月内其水份含量变化不大，表明本发明小儿宣肺止咳颗粒工艺稳定。 

本发明方案是经过发明人多次反复试验，不断改进调整总结出来的，上述本发明小儿宣肺止咳颗粒组合物的制备方法为最佳制备方法，临床药效学实验效果显著提高。 

下面以本发明制备的小儿宣肺止咳颗粒对比原工艺制备的冲剂，说明其主要药效学： 

主要药效学实验 

实验目的：通过对本发明小儿宣肺止咳颗粒和原冲剂的抗炎、止咳、化痰、镇痛、解热等药理实验研究，将本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组进行对比实验，观察其药理作用的强弱。 

试验方法：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响；对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响；对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响；对小鼠浓氨水引咳的影响；对小鼠二氧化硫引咳的影响；对小鼠气管酚红排泌量的影响；对醋酸所致小鼠扭体反应的影响；对小鼠热板致痛的影响；对大鼠体温升高的影响。 

实验结果：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组可以明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致小鼠足的肿胀；对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显的降低作用；明显减少浓氨水和二氧化硫引咳小鼠的咳嗽次数；能明显增加小鼠气管酚红的排泌量；对醋酸所致小鼠扭体具有明显的抑制作用；可延长热板致痛小鼠的痛阈值；对干酵母所致大鼠体温升高有明显的抑制作用。 

结论：本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组的抗炎、止咳、化痰、镇痛、解热等药理作用强，因此，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组宣肺解表，清热化痰的临床疗效好。 

以下药理实验所用药物的制备方法如下： 

1、本发明小儿宣肺止咳颗粒组的制备方法如下(按实施例1的方法制得)： 

处方为： 

麻黄105g    竹叶防风210g    西南黄芩210g 

桔梗105g    芥子105g        苦杏仁105g 

葶苈子105g  马兰210g        黄芪210g 

山药105g    山楂210g        甘草105g； 

制备方法为： 

以上十二味，麻黄粉碎，加80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，加醇量分别为5、4、3倍，合并醇提液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.08(80～85℃)，备用；其余十一味粉碎，加90℃水温浸三次，每次1小时，加水量分别为8、6、6倍，合并温浸液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(80～85℃)，待冷至室温，加入乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置24小时，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.21(80～85℃)，与上述麻黄稠膏混合，继续浓缩至相对密度为1.31(80～85℃)，加蔗糖、糊精适量，制成颗粒，干燥，制成1000g，分装，即得。 

2、原冲剂组的制备方法为：我们取中国专利(公开号为：CN 1094629A)公开处方各药材用量的低点，并给低点同时除以1.91，方便对比，具体制备方法如下： 

处方为： 

麻黄107.3g     竹叶防风209.4g   西南黄芩209.4g 

桔梗104.7g     白芥子104.7g     杏仁104.7g 

葶苈子104.7g   马兰209.4g       黄芪209.4g 

山药107.3g     山楂209.4g       甘草104.7g 

制备方法为： 

一、取麻黄粉碎，用70％乙醇回流提取二次，合并醇提液； 

二、其余十一味药粉碎，加水煎煮二次，煎煮液过滤，合并煎液，浓缩至相对密度为1.00-1.10，冷至室温，加等量70％乙醇充分搅拌均匀，静置，取上清液回收乙醇，继续浓缩至相对密度为1.10-1.30的浸膏； 

三、取步骤二所得浸膏，按1∶1.5-3∶1.5-3的比例加入蔗糖、糊精，与步骤一所得麻黄醇提液混匀、干燥、成型、包装，既得。 

一、对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药2h后，在小鼠左耳表面滴涂二甲苯0.05ml致炎，致炎15min后，并两耳根剪下左右二耳，将二耳重叠一起，用直径7mm的打孔器打圆形片，称其左右二耳片重量，并以左右耳片重量差值表示小鼠耳部炎症的肿胀程度。 

实验结果：见表1 

表1 对小鼠耳廓二甲苯所致肿胀的影响 

与对照组相比**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：对照组小鼠右耳明显红肿，厚度增加，耳廓肿胀度大。本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓的肿胀，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组抗炎作用强。 

二、对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药前2h将每只小鼠左后脚足跖用1％角叉菜 胶0.03mL。药后1h颈椎脱位处死动物，自踝关节0.5mm处剪下后足分别称重，以两足重量之差为肿胀度。 

实验结果：见表2 

表2 对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响 

与对照组相比**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组可明显抑制角叉菜胶致小鼠足的肿胀，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组抗炎作用强。 

三、对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药1h后各鼠静脉注射1％伊文斯兰溶液0.1ml/10g，同时腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死小鼠，用5ml生理盐水冲洗小鼠腹腔，收集冲洗液，3000rpm离心15min，取上清液用722分光光度计于590nm处比色测定光密度值。 

实验结果：见表3 

表3 小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 

与对照组相比**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组对醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显的降低作用，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组抗炎作用强。 

四、对小鼠浓氨水引咳的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药1h后，分别将小鼠置于倒置的500mL烧杯中，内放吸入10ml 20％氨水棉球，观察和记录小鼠3min内咳嗽的次数。 

实验结果：见表4 

表4 对小鼠浓氨水引咳的影响 

与对照组相比**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组均可使小鼠咳嗽次数明显减少，与对 照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组止咳作用强。 

五、对小鼠二氧化硫引咳的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药1h后，分别将小鼠置于倒置的500ml烧杯中，注入10ml二氧化硫气体，观察和记录小鼠2min内咳嗽的次数。 

实验结果：见表5 

表5 对小鼠二氧化硫引咳的影响 

与对照组相比**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组均可使小鼠咳嗽次数明显减少，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组止咳作用强。 

六、对小鼠气管酚红排泌量的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃 同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药0.5h后，腹腔注射5％酚红生理盐水0.1ml/10g体重，0.5h后处死动物，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放人盛有2ml生理盐水的试管中，再加0.1ml 5％的NaOH，用722型分光光度计(波长540nm)测OD值。 

实验结果：见表6 

表6 对小鼠气管酚红排泌量的影响 

与对照组相比**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组能使小鼠气管酚红排泌量明显增加，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组化痰作用强。 

七、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌雄兼有，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

昆明小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。连续给药3d，每日1次，末次给药1h后，每鼠均腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，记录20min内小鼠扭体次数，并计算各组镇痛百分率。进行组间显著性检验。 

实验结果：见表7 

表7 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 

与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组对醋酸所致小鼠扭体具有明显的抑制作用，有较好的量效关系，随着剂量的加大，扭体次数减少。本发明小儿宣肺止咳颗粒中、小剂量组和原冲剂组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)；本发明颗粒大剂量组与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒比原冲剂组的镇痛作用强。 

八、对小鼠热板致痛的影响 

实验材料 

1、动物：昆明种小鼠，雌性，体重18～22g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

将电热板仪调至(55±0.5)℃，对体重为18～22g的昆明种雌性小鼠进行筛选，记录小鼠投入热板至出现舔后足的时间作为该小鼠的痛阈值，筛选痛阈值在30s内的雌性小鼠50只，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药32、16、8g生药/kg；原冲剂组灌胃给药32g生药/kg。每天1次，连续给药3d，末次给药1h后，将小鼠放在电热板仪内，记录给药后出现舔后足的时间，用药后的痛阈值减去用药前痛阈值作为差值。 

实验结果：见表8 

表8 对小鼠热板致痛的影响 

与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组均可延长热板致痛小鼠的痛阈值。本发明小儿宣肺止咳颗粒中、小剂量组和原冲剂组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05＝；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组的镇痛作用强。 

九、对大鼠体温升高的影响 

实验材料 

1、动物：SD大鼠，体重180～220g。 

2、药物：原冲剂组14.28g生药/袋；本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中、小三个剂量组14.28g生药/袋。药物在实验前用蒸馏水配置，灌胃给药。 

实验方法 

SD大鼠50只，体重180～220g，于实验室环境适应3d，每天用体温计测肛内温度2次，实验当日每小时测体温1次，连续3次，选取体温变化不超过0.3℃的动物供实验用。将大鼠随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明小儿宣肺止咳颗粒组分别灌胃给药24、12、6g生药/kg；原冲剂组灌胃给药24g生药/kg。连续给药4d，第4d实验前禁食12h，给药30min后，每只大鼠背部皮下注射15％干酵母悬10ml/kg体重，分别于给药后的6、8、9、10h测体温1次，求出各测定时刻相对于正常体温的体温变化值。 

实验结果：见表9 

表9 对大鼠体温升高的影响 

与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与原冲剂组比△P＜0.05。 

结果表明：本发明小儿宣肺止咳颗粒组和原冲剂组对干酵母所致大鼠体温升高有明显抑制作用且有一定量效关系，剂量越大，作用越明显。本发明小儿宣肺止咳颗粒大、中剂量组和原 冲剂组在升温后9h、10h的体温明显低于对照组(P＜0.01＝，小剂量组在升温后9h、10h也有显著抑制作用(P＜0.05＝。本发明小儿宣肺止咳颗粒大剂量组在升温后10h的体温变化与原冲剂组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组的解热作用强。 

试验结论：本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组的抗炎、止咳、化痰、镇痛、解热等药理作用强，因此，本发明小儿宣肺止咳颗粒组比原冲剂组宣肺解表，清热化痰的临床疗效好。 

本发明具体实施方式： 

实施例1 

处方为： 

麻黄105g      竹叶防风210g    西南黄芩210g 

桔梗105g      芥子105g        苦杏仁105g 

葶苈子105g    马兰210g        黄芪210g 

山药105g      山楂210g        甘草105g 

制备方法为： 

以上十二味，麻黄粉碎，加80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，加醇量分别为5、4、3倍，合并醇提液，减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.08(80～85℃)，备用；其余十一味粉碎，加90℃水温浸三次，每次1小时，加水量分别为8、6、6倍，合并温浸液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(80～85℃)，待冷至室温，加入乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置24小时，取上清液回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.21(80～85℃)，与上述麻黄稠膏混合，继续浓缩至相对密度为1.31(80～85℃)，加蔗糖、糊精适量，制成颗粒，干燥，制成1000g，分装，即得。 

Claims (3)

1.一种小儿宣肺止咳颗粒组合物的制备方法，其特征在于：所述组合物的配方组成为：

制备方法为：

以上十二味，麻黄粉碎，加80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，加醇量分别为5、4、3倍，合并醇提液，减压回收乙醇，80～85℃浓缩至相对密度为1.08稠膏，备用；其余十一味粉碎，加90℃水温浸三次，每次1小时，加水量分别为8、6、6倍，合并温浸液，滤过，滤液80～85℃浓缩至相对密度为1.05，待冷至室温，加入乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置24小时，取上清液回收乙醇，并80～85℃浓缩至相对密度为1.21，与上述麻黄稠膏混合，80～85℃继续浓缩至相对密度为1.31，加蔗糖、糊精适量，制成颗粒，干燥，制成1000g，分装，即得。

2.根据权利要求1中所述的小儿宣肺止咳颗粒组合物的质量检测方法，其特征在于所述小儿宣肺止咳颗粒组合物的定性检测方法包括如下步骤：

a.取本品30g，研细，加醋酸乙酯40ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白芥子对照药材、南葶苈子对照药材各2g，分别加60～90℃的石油醚20ml，超声处理1小时，倾去石油醚液，药渣加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮比例为10∶1的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与南葶苈子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5～7分钟，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与白芥子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b.取本品20g，研细，加浓氨试液10ml，放置2小时，加氯仿40ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加1→20的盐酸乙醇溶液20ml使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液比例为4∶1∶0.1的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热约10分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取山楂对照药材0.5g，加醋酸乙酯10ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；吸取a项下供试品溶液及上述对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸比例为20∶4∶0.5的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热5～10分钟，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下，显相同颜色的斑点；紫外光灯下，显相同颜色的荧光斑点；

d.取本品15g，研细，加水100ml，超声处理5分钟，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次30ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，离心，取上清液浓缩至约1ml，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水比例为13∶7∶2的溶液在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下，显相同颜色的斑点；365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求1中所述的小儿宣肺止咳颗粒组合物的定量检测方法，其特征在于所述小儿宣肺止咳颗粒组合物的定量检测方法包括如下步骤：

色谱条件与***适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液的比例为24∶76的溶液为流动相，0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液为：pH3.5，精密称取干燥至恒重的磷酸二氢钾细粉6.8050g，置1000ml量瓶中，用适量水溶解并稀释至近刻度，加磷酸0.5ml，加水至刻度，摇匀，置冰箱中保存，备用；检测波长为275nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于7000；

对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品适量，加50％乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取0.5g，精密称定，精密加入50％乙醇25ml，用功率为250W、频率为20kHz进行超声处理20分钟，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。