CN102080108A - 用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法 - Google Patents
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Abstract
用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法，虎杖粉碎，放入酶溶液，抽真空，维持真空，破坏真空，保温；药材用乙醇提取，提取液制为浓缩液，调节pH值，沉淀，过滤，得白藜芦醇粗品和过滤液；将白藜芦醇粗品用乙醇溶解，经吸附洗脱，浓缩，沉淀，过滤，沉淀溶解，过滤，溶液回收乙酸乙酯，沉淀，过滤，干燥为白藜芦醇精品。过滤液调PH值，沉淀，过滤得大黄素粗品及过滤液；大黄素粗品用碱水溶解，吸附洗脱，调PH值，沉淀，过滤，干燥，加热回流溶解，过滤，回收乙酸乙酯，沉淀，干燥得大黄素精品。过滤液经吸附洗脱，浓缩，沉淀，过滤，干燥得虎杖甙粗品；虎杖甙粗品干燥，溶解，过滤，溶液回收乙酸乙酯，沉淀，沉淀物过滤，干燥得虎杖甙精品。本发明充分利用资源，可同时提取出大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三个有效成分，使虎杖中的大黄素等高附加值成分得到有效利用。
Description
技术领域
本发明涉及一种从中药中提取有效成份的方法，具体的是用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法。
背景技术
中药虎杖是蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的干燥根及根茎，为我国传统中药。分布于陕西南部、甘肃南部、华东、华中、华南、四川、贵州，我省产永善、威信、昭通、峨山、西畴、屏边、金平等。国内外学者对虎杖的化学成分做了许多研究，近年来，仍有不少对虎杖中化学成分的研究报道。概括起来，虎杖的成份复杂，含量较高的成分有蒽醌类化合物、芪类化合物等成分。其中蒽醌类蒽醌成分主要以大黄素为主，芪类化合物主要以白藜芦醇、白藜芦醇甙为主，白藜芦醇甙，又名：虎杖甙。
目前有关虎杖中白黎芦醇的研究大多集中在其药理的研究，对其产品的制备与开发仍处于起始状态。现有生产白藜芦醇的工艺通常是药材粉碎→发醇→醇提→浓缩→有机溶液萃取→回收溶剂→浓缩→醇溶→柱层析→脱色→结晶与重结晶。现有技术主要存在以下问题:
(1)现有工艺多停留在液液萃取、硅胶柱层析等传统的分离方法，技术相对陈旧、生产周期长，过程繁琐，产品得率和质量不高，存在溶剂残留、目标产物回收率低、有机溶剂消耗大，非环境友好等问题;
(2)虎杖中含有丰富的大黄素和白藜芦醇甙，大黄素和白藜芦醇甙具有重要的生理活性，但大部分工艺未对其进行提取，而是将大黄素等高附加值成分作为废料处理，造成对资源的极大浪费。
发明内容：
本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种用真空酶解技术提取虎杖中的大黄素、虎杖甙及白藜芦醇。按本发明的方法可从虎杖原料中提取大黄素、虎杖甙及白藜芦醇，且工艺简便，产品得率高，产品质量好。
本发明所采用的技术方案为：具体工艺如下：
（1） 将虎杖药材粉碎至粒径小于5毫米，
（2） 用酶和清水配制酶溶液，
（3） 药材放入容器，加入药材2-4倍量（ w/v）酶溶液，搅拌均匀，
（4） 酶解
容器内抽真空，当真空度抽至0.5-0.8Mpa,关闭真空阀，维持真空1-5秒，立刻打开放空破坏真空，反复操作3-5次，50OC保温至少2小时；
（5） 提取白藜芦醇粗品
酶解后的药材用浓度70%的乙醇3-5倍量（ w/v），70℃保温提取至少2次、过滤后合并提取液，真空度0.08Mpa减压回收乙醇，得浓缩液，调节浓缩液PH值=9-10，静置沉淀至少7小时，将沉淀物用滤布过滤，滤饼为白藜芦醇粗品滤布下为过滤液；
（6） 制白藜芦醇精品
将步骤（5）得到的白藜芦醇粗品用浓度为50%的乙醇至少3倍量（ w/v）溶解，经大孔树脂吸附洗脱后，洗脱液经浓缩至1倍体积时，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤，滤布上的沉淀物用3倍量（ w/v）的乙酸乙酯加热回流溶解，溶液经滤布过滤，将溶液常压回收乙酸乙酯至1倍量时，静置沉淀不少于8小时，将沉淀物用滤布过滤，干燥1-2小时后即为白藜芦醇精品；
（7） 提取大黄素粗品
将步骤（5）得到的过滤液调PH值=2-3，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤得大黄素粗品及过滤液；
（8） 制大黄素精品
将步骤（7）得到的大黄素粗品用PH=9-10的碱水溶解，经大孔树脂吸附洗脱，将洗脱液调PH值=2-3时，静置沉淀8小时将沉淀用滤布过滤，将沉淀干燥，用3倍（w/v）乙酸乙酯加热回流溶解，经滤布过滤后将溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时以上将沉淀用滤布过滤，干燥2小时后得大黄素精品；
（9） 提取虎杖甙粗品
将步骤（7）最后得到的过滤液经大孔树脂吸附洗脱，洗脱液经浓缩后静置沉淀至少8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥至少2小时后得虎杖甙粗品；
（10） 制虎杖甙精品
将步骤（9）得到的虎杖甙粗品干燥，用3倍乙酸乙酯加热回流溶解为溶液，滤布过滤，溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥3小时后得虎杖甙精品。
所述的步骤（2）中所述的酶溶液浓度为浓度为0.01%-2%的，其中的酶为果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、大豆甙酶或复合纤维素酶之一种。
所述步骤 （6）、（8）、（9）和（10）中的干燥为50OC真空干燥。
本发明的关键是在一次工艺流程中从虎杖中同时提取出大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三种成份，使虎杖原料利用最大化。虎杖的成份复杂，从虎杖中分离并提纯大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三种成份具有较大的难度，本发明针对虎杖的特性专门配制适合的酶液对虎杖进行酶解，采用较适合的真空度抽出药材组织中的空气，通过3-5次释放真空后利用大气压将生物复合酶压入药材组织，提高生物复合酶对虎杖组织结构的破坏，以大幅度地提高有效成分的收率。通过生物酶品种的选择，酶解时间的控制用一步法从虎杖中可同时提取出大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三个有效成分。酶解后经乙醇低温提取、溶剂回收、调节PH值、沉淀过滤，过滤液经大孔树脂吸附分离后再经纯化后可得大黄素、虎杖甙及白藜芦醇。降低生产成本，提高原料利用率，获得高含量白黎芦醇、虎杖甙、大黄素，增加产品附加值。利用该工艺可提高30%的收率；缩短提取时间，缩短工艺路线，降低60%的生产成本；提高60%原料利用率；增加产品附加值200%。本发明充分利用资源，可同时提取出大黄素、虎杖甙及白藜芦醇三个有效成分，使虎杖中的大黄素等高附加值成分得到有效利用。本发明实现了虎杖资源利用最大化，还具有技术先进、生产周期短，过程简单，产品得率高，产品质量好，溶剂残留低，目标产物回收率高、有机溶剂消耗小的特点。
具体实施方式
（1） 将合格的虎杖药材100g粉碎。
（2） 用清水300ml与选择的酶配制成酶溶液。
（3） 药材放入2000ml圆底烧瓶中，加入酶溶液，搅拌均匀。
（4） 酶解
烧瓶内抽真空至要求,关闭真空阀，保持真空1-5秒，立刻打开放空破坏真空，反复操作3-5次，50OC保温2-3小时。
（5） 提取白藜芦醇粗品
酶解后的药材加入浓度70%的乙醇，乙醇量为酶解后的药材（w/v）3-5倍量，70℃保温提取，过滤后合并提取液，真空度0.8Mpa减压回收乙醇，得浓缩液，调节浓缩液调PH值，静置沉淀，将沉淀物用滤布过滤，滤布上为白藜芦醇粗品，滤布下为过滤液。
（6） 制白藜芦醇精品
将步骤（5）得到的白藜芦醇粗品用浓度为50%的乙醇溶解，乙醇为白藜芦醇粗品的（w/v）3倍量，经大孔树脂吸附洗脱后，洗脱液经浓缩至1倍体积，静置沉淀，将沉淀物用滤布过滤，滤布上的沉淀物后用（w/v）3倍量的乙酸乙酯加热回流溶解，溶液经滤布过滤，去除机械杂质，将过滤后的溶液常压回收乙酸乙酯至1倍量，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤，50OC真空干燥至少2小时后为白藜芦醇精品，HPLC检测含量。
（7） 提取大黄素粗品
将步骤（5）得到的过滤液调PH值=2-3，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤，得大黄素粗品及过滤液。
（8） 制大黄素精品
将步骤（7）得到的大黄素粗品用PH=9-10的碱水溶解，经大孔树脂吸附洗脱，将洗脱液调PH值=2-3时，静置沉淀8小时将沉淀用滤布过滤，将沉淀干燥，用（w/v）3倍量乙酸乙酯加热回流溶解，经滤布过滤去除机械杂质，将溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀至少8小时将沉淀用滤布过滤，干燥，得大黄素精品，HPLC检测含量。
（9） 提取虎杖甙粗品
将步骤（7）最后得到的过滤液经大孔树脂吸附洗脱，洗脱液经浓缩后静置沉淀至少8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥后得虎杖甙粗品。
（10） 制虎杖甙精品
将步骤（9）得到的虎杖甙粗品干燥，用（w/v）3倍乙酸乙酯加热回流溶解为溶液，滤布过滤，溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀至少8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥得虎杖甙精品，HPLC检测含量。
Claims (3)
1.用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法，其特征在于，具体工艺如下：
（1） 将虎杖药材粉碎至粒径小于5毫米，
（2） 用酶和清水配制酶溶液，
（3） 药材放入容器，加入药材2-4倍量酶溶液（ w/v），搅拌均匀，
（4） 酶解
容器内抽真空，当真空度抽至0.5-0.8Mpa,关闭真空阀，维持真空1-5秒，立刻打开放空破坏真空，反复操作3-5次，50OC保温至少2小时；
（5） 提取白藜芦醇粗品
酶解后的药材用浓度70%的乙醇（ w/v）3-5倍量，70℃保温提取至少2次，过滤后合并提取液，真空度0.08Mpa减压回收乙醇，得浓缩液，调节浓缩液PH值=9-10，静置沉淀至少7小时，将沉淀物用滤布过滤，滤饼为白藜芦醇粗品滤布下为过滤液；
（6） 制白藜芦醇精品
将步骤（5）得到的白藜芦醇粗品用浓度为50%的乙醇至少3倍量（ w/v）溶解，经大孔树脂吸附洗脱后，洗脱液经浓缩至1倍体积时，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤，滤布上的沉淀物用3倍量（ w/v）的乙酸乙酯加热回流溶解，溶液经滤布过滤，将溶液常压回收乙酸乙酯至1倍量时，静置沉淀不少于8小时，将沉淀物用滤布过滤，干燥1-2小时后即为白藜芦醇精品；
（7） 提取大黄素粗品
将步骤（5）得到的过滤液调PH值=2-3，静置沉淀至少8小时，将沉淀物用滤布过滤得大黄素粗品及过滤液；
（8） 制大黄素精品
将步骤（7）得到的大黄素粗品用PH=9-10的碱水溶解，经大孔树脂吸附洗脱，将洗脱液调PH值=2-3时，静置沉淀8小时将沉淀用滤布过滤，将沉淀干燥，用3倍量（ w/v）乙酸乙酯加热回流溶解，经滤布过滤后将溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时以上将沉淀用滤布过滤，干燥2小时后得大黄素精品；
（9） 提取虎杖甙粗品
将步骤（7）最后得到的过滤液经大孔树脂吸附洗脱，洗脱液经浓缩后静置沉淀至少8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥至少2小时后得虎杖甙粗品；
（10） 制虎杖甙精品
将步骤（9）得到的虎杖甙粗品干燥，用3倍乙酸乙酯加热回流溶解为溶液，滤布过滤，溶液常压回收乙酸乙酯，静置沉淀不少于8小时，沉淀物用滤布过滤，干燥3小时后得虎杖甙精品。
2.如权利要求1所述的用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的酶溶液浓度为0.01%-2%的，其中的酶为果胶酶、淀粉酶、纤维素酶、大豆甙酶或复合纤维素酶之一种。
3.如权利要求1所述的用真空酶解技术提取虎杖中大黄素、虎杖甙及白藜芦醇的方法，其特征在于，步骤 （6）、（8）、（9）和（10）中的干燥为50OC真空干燥。
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