CN101085041B - 荷叶总生物碱提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从中药荷叶中提取得到的总生物碱提取物及其制备方法。该提取物主要包括荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、番荔枝碱、莲碱、鹅掌揪碱、N-去甲基亚美罂粟碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、亚美帕碱、N-甲基异衡州乌药碱、N-甲基衡州乌药碱、去氢荷叶碱、去氢莲碱及其衍生物等。该提取物可由溶剂提取法、溶剂萃取法、离子交换树脂法、大孔吸附树脂法、超临界流体萃取法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法,或这些方法的任意组合制备获得。所制得的荷叶总生物碱提取物中各种生物碱类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),其中荷叶碱含量占全部总生物碱含量的5~100%(w/w)。
Description
技术领域
本发明属医药技术领域,具体涉及一种中药荷叶的总生物碱提取物及制备方法、质量控制方法及其在医药和保健食品领域的应用。
背景技术
荷叶系睡莲科莲属植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶。传统医学认为荷叶性味苦寒,具有清暑利湿,生发清阳,清心去热,止血利水的活性。据《本草纲目》记载“荷叶服之,令人瘦劣”、“生发元气,裨助脾胃,涩精浊,散淤血,消肿痛,发痘疮”。现代药理研究表明荷叶具有降脂减肥、抗氧化、抗衰老、抑制脂肪肝、抑菌、抑制HIV增殖、抗病毒、抗炎、抗过敏等作用。荷叶的临床应用较多的是以复方的形式用于减肥降脂、改善肝脏代谢、延缓衰老等。荷叶中主要含有生物碱类、黄酮类、多糖类等成分,药理研究表明生物碱类成分为其主要活性成分。迄今,未见涉及荷叶总生物碱提取物及其制备方法和用途的专利。
发明内容
本发明的目的在于提供一种荷叶总生物碱提取物及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种荷叶总生物碱提取物与某些酸形成的盐。
本发明的再一个目的在于提供一种荷叶总生物碱提取物与某些金属离子形成的盐或络合物。
本发明提出的荷叶总生物碱提取物,是从中药荷叶中提取的含有多种生物碱类活性成分的组合,其中主要化合物结构如下:
1.苄基异喹啉类
苄基异喹啉类成分结构母核
2.阿朴啡类
阿朴啡类成分结构骨架
鹅掌揪碱
3.去氢阿朴啡类
去氢阿朴啡类成分结构骨架
本发明所述原料荷叶,来源于睡莲科莲属的任意一种植物。作为提取荷叶总生物碱的原材料,可以是市售荷叶饮片,也可以是这些植物的茎、叶、花穗、果实、地下根茎及根等任一部位或全部植株,其中优选的药材部位为这些植物的干燥叶。上述所述的荷叶包括未经任何炮制处理的原药材及饮片,还包括各种炮制品,如“炒荷叶”、“麸炒荷叶”、“荷叶炭”等。
本发明所述的荷叶总生物碱提取物,是指从上述任一植物的任何部位提取得到的,包含多种荷叶生物碱类活性成分的组合物,其中优选的是从Nelumbonucifera Gaertn.干燥叶中提取制备得到的,含有多种生物碱类活性成分的组合物。这些生物碱类成分主要包括荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、0-去甲基荷叶碱、番荔枝碱、莲碱、鹅掌揪碱、N-去甲基亚美罂粟碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、亚美帕碱、N-甲基异衡州乌药碱、N-甲基衡州乌药碱、去氢荷叶碱、去氢莲碱以及以其为母核的其它衍生物。
作为荷叶总生物碱提取物,其中各种生物碱类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),其中优选的为50~100%(w/w)。
本发明所述的荷叶总生物碱提取物,可以与某些酸,如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸或甲酸、醋酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸等有机酸,形成盐类衍生物。这些衍生物具有与上述荷叶总生物碱提取物相同或相近的药理活性和用途。
本发明所述的荷叶总生物碱提取物,还可以与钠、钾、钙、铁、铝、锌、铜、铬、锶等金属离子形成金属盐或络合物。这些金属盐或络合物具有与上述荷叶总生物碱提取物相同或相近的药理活性或用途。
在本发明所述的荷叶总生物碱提取物所涵盖的各种生物碱类活性成分之中,最主要的是荷叶碱、N-去甲基荷叶碱、O-去甲基荷叶碱、番荔枝碱、莲碱、鹅掌揪碱、N-去甲基亚美罂粟碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡等成分。作为荷叶总生物碱提取物,荷叶碱的含量占全部总生物碱含量的5~100%(w/w)。
本发明还提出了所述荷叶总生物碱提取物的制备工艺,它可以采用以下任意一种方法,或这些方法的任意组合进行制备:(1)溶剂提取法;(2)溶剂萃取法;(3)离子交换树脂法;(4)大孔吸附树脂法;(5)超临界流体萃取法;(6)柱色谱法;(7)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为离子交换树脂法。
在使用这些方法进行制备时,一般包括以下几个步骤:
(1)提取:所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂,或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂,或由这些溶剂与酸、碱配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。
优选的提取工艺为:荷叶药材加30~90%乙醇,回流提取2~3次,每次提取1~2小时,溶剂用量为15~30倍量(L/kg)。
(2)过滤:包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法,使用或不使用以下任意一种澄清剂或其组合:醇沉剂,明胶,高岭土,各种树脂,聚乙二醇,聚乙三醇,壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。
(3)浓缩:包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等。
(4)干燥:包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
当采用溶剂萃取法进行制备时,一般先将提取物混悬于水中,然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、***、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取获得其中的总生物碱成分,得到总生物碱提取物。
当使用离子交换树脂法时,所用的树脂可以是强酸性、弱酸性、大孔型、凝胶型等任何一种类型,这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同,如732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072等,其中优选的为强酸性阳离子树脂,如732型、D001-CC、D001-SS等,所用的洗脱剂为酸水和含氨的乙醇、甲醇等,其中优选的为0~100%的氨醇。
优选的荷叶生物碱提取物树脂纯化工艺为:选用732型、D001-CC、D001-SS等强酸性阳离子交换树脂作为纯化用树脂,荷叶乙醇提取物以总生物碱量计的上样液浓度为0.1~1mg/mL,吸附流速为3~15BV/h,树脂柱径高比为1∶5~1∶10,以总生物碱量计的上样量为5~50mg/mL,0~70%乙醇洗脱1~7倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3~10BV/h,用40~90%氨性乙醇(其中氨浓度为0.1%~5%)洗脱3~10倍树脂体积,洗脱流速为8~20BV/h。
当采用大孔吸附树脂法进行制备时,所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型,这些树脂的代号由于生产厂家不同而不同,如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等,其中优选的为弱极性或中等极性的树脂,如AB-8、HPD400、D101等。所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等,其中优选的为0~100%的乙醇。
当采用超临界CO2流体萃取法进行制备时,可以对荷叶原材料直接进行萃取,也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃取。萃取时可以使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物:水、醇类、酮类及酯类溶剂。
当采用柱层析法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物,也可以是经上述溶剂萃取法、离子交换树脂法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纤维素等,所用的洗脱液因固定相的不同而不同,一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。
当采用液-液逆流分配色谱法进行制备时,其处理的对象可以是上述提取步骤的产物,也可以是经上述溶剂萃取法、离子交换树脂法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃取法初步纯化后的产物。一般先将提取物混悬于水中,然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、***、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质,然后用合适极性的溶剂,如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等,或是这些溶剂的混合物,萃取获得其中的总生物碱成分,得总生物碱提取物。
该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种:
1.总生物碱
精密称取荷叶碱对照品适量(约5mg),置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取荷叶碱对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL,蒸干,加溴甲酚绿缓冲液(pH 5.6)4.0mL及氯仿6.0mL,剧烈挣摇2min,于分液漏斗中静置分层2h,分取氯仿层,于413nm处测定吸光度。以荷叶碱对照品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
精密称取荷叶总生物碱提取物样品各3份,每份5mg,置25mL量瓶中,加甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取上述样品溶液0.5mL,荷叶碱对照品溶液0.5mL、1.0mL,蒸干,加溴甲酚绿缓冲液(pH 5.6)4.0mL及氯仿6.0mL,剧烈挣摇2min,于分液漏斗中静置分层2h,分取氯仿层,于413nm处测定吸光度。外标两点法计算含量。
2.荷叶碱
色谱条件:色谱柱:Hypersil C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-水(43∶57);检测波长:280nm;柱温:30℃。
标准曲线绘制:分别精密吸取荷叶碱对照品溶液(浓度为0.0515μg/μL)0、2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪,测定各色谱峰峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
含量测定:精密称取3批荷叶生物碱提取物样品各3份,每份约5mg,置25mL量瓶中,加甲醇超声溶解,并稀释至刻度,摇匀,作为荷叶碱含量测定的供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,测定荷叶碱峰面积,计算含量。
具体实施方式
实施例1:荷叶总生物碱提取物制备工艺
取荷叶饮片1kg,加90%乙醇16L,回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,提取物加1%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度为0.165mg/mL(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过300mL D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为10BV/h,树脂柱径高比为1∶8,上样量为27.5mg/mL(以总生物碱量计),50%乙醇洗脱5倍树脂体积进行除杂,除杂流速为10BV/h,70%氨性乙醇(氨浓度为1%)洗脱7倍树脂体积,洗脱流速为10BV/h,收集70%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
测定荷叶总生物碱提取物中总生物碱含量为56%,荷叶碱含量为21%。
实施例2:荷叶总生物碱提取物制备工艺
取荷叶饮片1kg,加70%乙醇20L,回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,提取物加0.5%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度为0.33mg/mL(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过300mL D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为5BV/h,树脂柱径高比为1∶10,上样量为30.25mg/mL(以总生物碱量计),水洗脱10倍树脂体积进行除杂,除杂流速为10BV/h,90%氨性乙醇(氨浓度为0.5%)洗脱5倍树脂体积,洗脱流速为10BV/h,收集90%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
测定荷叶总生物碱提取物中总生物碱含量为53%,荷叶碱含量为20%。
实施例3:荷叶总生物碱提取物制备工艺
取荷叶饮片1kg,加50%乙醇25L,回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,提取物加1.5%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度为0.495mg/mL(以总生物碱量计),以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过300mL D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为3BV/h,树脂柱径高比为1∶6,上样量为24.75mg/mL(以总生物碱量计),10%乙醇洗脱6倍树脂体积进行除杂,除杂流速为5BV/h,50%氨性乙醇(氨浓度为0.3%)洗脱7倍树脂体积,洗脱流速为10BV/h,收集50%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
测定荷叶总生物碱提取物中总生物碱含量为55%,荷叶碱含量为18%。
实施例4:荷叶总生物碱提取物制备工艺
取荷叶饮片1kg,加70%乙醇18L,回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,提取物加水分散溶解,使上样液浓度为0.165mg/mL(以总生物碱量计),通过7L D101大孔吸附树脂,吸附流速为3BV/h,树脂柱径高比为1∶9,上样量为27.5mg/mL(以总生物碱量计),水洗脱4倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3BV/h,90%乙醇洗脱4倍树脂体积,洗脱流速为6BV/h,收集90%乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
测定荷叶总生物碱提取物中总生物碱含量为58%,荷叶碱含量为18%。
实施例5:荷叶总生物碱片的制备
荷叶总生物碱提取物 100g
淀粉 100g
上述组分混合均匀,加滑石粉适量,压制成1000片。
实施例6:荷叶总生物碱复方制剂的制备
荷叶总生物碱提取物 50g
何首乌总二苯乙烯提取物 50g
山楂提取物 100g
决明子提取物 300g
上述组分混合均匀,装入硬明胶胶囊中,共2000粒胶囊。
Claims (4)
1.荷叶总生物碱提取物制备方法,其特征在于:选用732型、D001-CC、D001-SS、D061、D072强酸性阳离子交换树脂作为纯化用树脂,荷叶乙醇提取物以总生物碱量计的上样液浓度为0.1~1mg/mL,吸附流速为3~15BV/h,树脂柱径高比为1∶5~1∶10,以总生物碱量计的上样量为5~50mg/mL,0~70%乙醇洗脱1~7倍树脂体积进行除杂,除杂流速为3~10BV/h,用40~90%氨性乙醇洗脱3~10倍树脂体积,其中氨性乙醇的氨浓度为0.1%~5%,洗脱流速为8~20BV/h。
2.荷叶总生物碱提取物制备方法,其特征在于:取荷叶饮片1kg,加90%乙醇16L,回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,提取物加1%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度以总生物碱量计为0.165mg/mL,以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过300mL D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为10BV/h,树脂柱径高比为1∶8,上样量以总生物碱量计为27.5mg/mL,50%乙醇洗脱5倍树脂体积进行除杂,除杂流速为10BV/h,70%氨性乙醇洗脱7倍树脂体积,其中氨性乙醇的氨浓度为1%,洗脱流速为10BV/h,收集70%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
3.荷叶总生物碱提取物制备方法,其特征在于:取荷叶饮片1kg,加70%乙醇20L,回流提取3次,每次提取1.5小时,减压回收溶剂,提取物加0.5%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度以总生物碱量计为0.33mg/mL,以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过300mL D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为5BV/h,树脂柱径高比为1∶10,上样量以总生物碱量计为30.25mg/mL,水洗脱10倍树脂体积进行除杂,除杂流速为10BV/h,90%氨性乙醇洗脱5倍树脂体积,其中氨性乙醇的氨浓度为0.5%,洗脱流速为10BV/h,收集90%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
4.荷叶总生物碱提取物制备方法,其特征在于:取荷叶饮片1kg,加50%乙醇25L,回流提取2次,每次提取2小时,减压回收溶剂,提取物加1.5%盐酸水溶液分散溶解,使酸水溶液浓度以总生物碱量计为0.495mg/mL,以3000转/分钟的转速离心30min,取上清液,通过300mL D001-CC大孔型强酸性阳离子交换树脂,吸附流速为3BV/h,树脂柱径高比为1∶6,上样量以总生物碱量计为24.75mg/mL,10%乙醇洗脱6倍树脂体积进行除杂,除杂流速为5BV/h,50%氨性乙醇洗脱7倍树脂体积,其中氨性乙醇的氨浓度为0.3%,洗脱流速为10BV/h,收集50%氨性乙醇洗脱液,回收溶剂,减压干燥,即为荷叶总生物碱提取物。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN1923829A (zh) * | 2006-09-21 | 2007-03-07 | 福州大学 | 一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途 |
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2007
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CN1923829A (zh) * | 2006-09-21 | 2007-03-07 | 福州大学 | 一种采用聚酰胺分离纯化荷叶黄酮和荷叶生物碱的制备方法与用途 |
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肖桂青等.荷叶中生物碱类成分的研究进展.化学与生物工程23 5.2006,23(5),1-2. |
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赵骏等.利用大孔吸附树脂纯化荷叶生物碱.中药材26 9.2003,26(9),669-670. |
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