CN101066286A - 具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了中药北沙参提取物及其制备方法，主要是通过水提取，醇沉，大孔吸附树脂吸附，用水洗去杂质，用醇液洗脱得到。该提取物主要含有木酯素苷、香豆素苷、以及苯丙素苷等三类活性成分，包括glehlinoside A、bergaptol 5－O－β－D－gentiobioside、白花前胡苷等21种化合物。实验结果显示，其抗胃溃疡、抗氧化和镇痛效果显著。该提取物作用物质基础和作用机理明确，制备工艺简单，适合工业化生产，可作为治疗胃溃疡以及慢性胃炎药物原料，按常规工艺制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或复方制剂等临床上可接受的剂型。

Description

具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，涉及中药北沙参提取物及其制备方法，本发明还涉及北沙参提取物用于抗胃溃疡的医药用途。

背景技术

胃溃疡是消化***常见多发病，且近年来发病率呈上升趋势。其病理生理过程较为复杂，概括说是攻击因子对胃粘膜的破坏作用与防御因子对胃粘膜的保护作用的平衡失调所致。攻击因素有胃酸、胃蛋白酶、反流的上部小肠液、幽门螺杆菌等；保护因素包括胃粘膜屏障和胃粘液屏障。胃粘膜屏障不仅指胃粘膜上皮的保护作用，而且也包括了胃粘膜血流量、各种胃粘膜保护因子如***素等；胃粘液屏障即胃粘液碳酸氢盐屏障。任何原因导致攻击因素加强或保护因子减弱时，均可导致胃粘膜损伤。此外，近年来还发现氧自由基与多价不饱和脂肪酸结合产生MDA等脂质过氧化物，可破坏线粒体和溶酶体膜，造成细胞死亡，形成溃疡。许多中药能有效清除氧自由基，抑制胃粘膜中的脂质过氧化反应，从而抑制溃疡形成。

目前，临床上常用抗溃疡药物仍未能解决溃疡复发率高的问题，且不良反应问题日趋暴露。市场对高效、低毒的新型抗溃疡药物需求迫切。近年来，国内外学者开展了中药治疗胃溃疡的实验研究，显示出传统中药在增强胃粘膜防御能力、提高愈合质量、减少复发且毒副反应低等方面的优势，因此对中药治疗胃溃疡的作用机理和作用物质基础的探讨越来越受到人们的重视。

北沙参为常用滋补肺胃阴虚中药。现代药理研究表明北沙参及其化学成分具有抗氧化，镇痛，镇静，抗菌，抗真菌，抑制酪氨酸酶，免疫调节，以及抗癌，抗突变等多方面作用。临床上，有关治疗胃阴虚证的报道主要为北沙参与其他药物配伍的复方汤剂，如沙参麦冬汤及养阴益胃汤为治疗胃脘痛的经典方，疗效显著。此外，由于其良好的治疗胃阴虚证的作用，含北沙参的复方制剂及保健茶获得了多项国家专利。尚未见有关北沙参或其提取物在治疗胃溃疡或慢性胃炎药物中的应用的报道。近年来，我们采用活性示踪的方法，对北沙参进行***的化学研究，从中分离得到了41个天然化合物(Chem.Pharm.Bull.，2002，50(1)：73-77；中草药，2002，33(12)：1063-1065)，包括三类具有新结构类型的化合物(1，4-二芳基丁烷型木脂素，8-O-4′型新木脂素和联苯阿魏酸酯，为其临床应用提供了科学依据。

发明内容

本发明的目的在于提供中药北沙参中含有木酯素苷、香豆素苷、以及苯丙素苷等三类活性成分的提取物的制备方法，并明确提出了其治疗胃溃疡的医药用途，而且提供了一种科学稳定的，适用于工业化生产的制备木酯素苷和香豆素苷类成分的方法。

北沙参提取物的制备方法是北沙参粉碎后，经水(稀醇)煎煮(或渗滤)，醇沉，大孔吸附树脂吸附，用水洗去杂质，用醇液洗脱得到。其特征包括如下3步骤：

A、水提取：北沙参粗粉，加6-10倍量的水浸泡，加热回流提取，每次1-3小时，提取2-4次，合并各次提取液，减压浓缩至50℃时浓缩液相对密度为1.10-1.20。

B、醇沉：向A步水提浓缩液中加入乙醇，至含醇量为60-90％，放置，滤过，合并滤液，减压回收溶剂至溶液所含生药的浓度为3-5g/ml。

C、大孔树脂吸附：B步所得溶液经大孔吸附树脂吸附，用稀醇(0-20％)洗去杂质，再用50-75％醇液洗脱得醇溶液，回收溶剂得到该提取物。

进一步，该提取物经反复的Sephadex LH-20柱色谱及反相ODS柱色谱，水-甲醇混合溶剂梯度洗脱，得到21个化合物，经理化方法和核磁共振谱学分析，确定了它们的结构。其中，7个木酯素或异木酯素类化合物，分另为glehlinoside A，glehlinoside B，(-)-secoisolariciresinol4-O-β-D-glucopyranoside，(-)-secoisolariciresinol，glehlinoside C，橙皮素A(cirtrusin A)，以及(7R，8S)-dehydrodiconiferylalcohol4，9-di-O-β-D-glucopyranoside；8个香豆素类化合物，分别为东莨菪素(scopoletin)，蛇床子素(cnidilin)，(3’R)-hydroxymarmesin 4’-O-β-D-glucopyranoside，bergaptol 5-O-β-D-gentiobioside，marmesinin，bergaptol-O-β-D-glucopyranoside，xanthotoxol 8-O-β-D-glucopyran-oside，以及4”-hydroxyimperatorin 4”-O-β-D-glucopyranoside；5个苯丙素类化合物，分别为白花前胡苷(baihuaqianhuside)，丁香苷(syring-in)，icariside D，2-(4′-hydroxyphenol)-glycol mono trans-ferulate，4-[β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyloxy]-3-methoxy-propiophenone。此外，还分离得到腺苷(adenosine)。Glehlinoside A，glehlinoside B，glehlinoside C，4-[β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyloxy]-3-methoxypropiophenone，以及bergaptol5-O-β-D-gentiobioside为发明人所阐明的新化合物。上述化合物的分离及结构鉴定阐明了该提取物的物质基础。

发明人分别采用HCl/EtOH诱导的小鼠胃溃疡模型、H₂O₂/Fe²⁺***羟自由基清除作用的测定、醋酸刺激所致小鼠扭体反应的测定，考察了提取物的抗胃溃疡、抗氧化和镇痛作用。实验结果表明，北沙参提取物抗溃疡作用与西米替丁相似，且具有显著的自由基清除作用和镇痛作用，其治疗胃溃疡的机理可能是促进胃粘膜的自由基清除，减轻脂质过氧化。

综上所述，本发明提取物具有作用物质基础和作用机理明确，制备工艺简单，适合工业化生产的特点，可作为治疗胃溃疡以及慢性胃炎药物原料，可按常规工艺制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或复方制剂等临床上可接受的剂型。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步说明本发明，实施例仅用于说明，不能限制本发明的范围。

实施例1

取北沙参粗粉5kg，加35L水浸泡，加热回流提取3次，提取时间分别为2、2、1小时，合并水提取液，滤过，60℃减压浓缩至相对密度为1.20(50℃)，得浓缩液；向浓缩液中加入乙醇，至含醇量为90％，放置，滤过，合并滤液，减压回收溶剂至溶液所含生药的浓度为50g/ml，滤过；滤液经大孔吸附树脂吸附，树脂用量6kg，分别用水和20％乙醇洗去杂质，再用50％乙醇液洗脱，收集醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥粉碎，得到该提取物81g。

实施例2

取北沙参粗粉5kg，加35L水浸泡，加热回流提取3次，提取时间分别为2、2、1小时，合并提取液，滤过，60℃减压浓缩至相对密度为1.10(50℃)，得浓缩液；向浓缩液中加入乙醇，至含醇量为60％，放置，滤过，合并滤液，减压回收溶剂至溶液所含生药的浓度为25g/ml，滤过；滤液经大孔吸附树脂吸附，树脂用量10kg，分别用水和20％乙醇洗去杂质，再用75％乙醇液洗脱，收集醇洗脱液，减压回收溶剂，真空干燥粉碎，得到该提取物153g。

实施例3北沙参提取物对HCl/EtOH诱导的小鼠胃溃疡的抑制作用

(1)实验材料

动物：雄性KM小鼠(25±2g)28只，给药前禁食24小时，自由饮水。

试剂：0.3M HCl/60％EtOH，0.2％CMCNa，5％***，生理盐水，西米替丁。

材料与仪器：1ml小鼠灌胃器，1ml注射器，手术剪，镊子，毫米尺，容量瓶。

(2)实验方法

小鼠随机分为4组，每组10只：阴性对照组(0.2％CMCNa，10ml/kg，i.g.)，阳性对照组(西米替丁，100mg/kg^-1，i.g.)，药物组(200，400mg/kg，i.g.)。给药后50分钟，灌胃给与0.2m l，0.3M HCl/60％EtOH致溃疡，1小时后取胃，注入1ml生理盐水使其膨胀，用5％的***固定30分钟后，沿胃大弯剪开，用肉眼可见胃粘膜上平行胃长轴方向有伸长的黑-红带，测量每个溃疡的长度(mm)，溃疡指数(UI)为所有溃疡长度之和。

抑制率计算：

I(％)＝[UI(对照组)-UI(给药组)]/UI(对照组)×100％

(3)实验结果

北沙参提取物(按小鼠体重50，100mg/kg给药)及阳性对照组的溃疡抑制率分别为38.5％，58.2％和60.8％，显示出与阳性药西米替丁相似的抗溃疡作用。结果见表1。

表1北沙参提取物对HCl/EtOH诱导的小鼠胃溃疡的抑制作用[ x±S.E.M.(n＝10)]

组别

剂量(mg/kg)

溃疡指数(UI)

抑制率(％)

0.2％CMCNa西米替丁提取物I提取物II

--10050100

43.6±7.417.1±4.5*26.8±3.7*18.2±6.6*

--60.838.557.2

*与模型组比较p＜0.01

实施例4北沙参提取物对H₂O₂/Fe²⁺***产生羟自由基的清除作用

(1)试验材料

试剂：75mM邻二氮菲无水乙醇溶液，1.0mM PBS溶液，7.5mM硫酸亚铁溶液，0.6％H₂O₂溶液

材料与仪器：721E可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，10ml离心管。

(2)实验方法

以邻二氮菲-Fe²⁺氧化法检测H₂O₂/Fe²⁺***产生的羟自由基。用蒸馏水将75mM的邻二氮菲无水乙醇溶液稀释至7.5mmol/L，依次往10mL的离心管中加入0.1mL的7.5mmol/L的邻二氮菲溶液，0.5mL的1.0mmol/L的PBS溶液，0.1mL的7.5mmol/L的硫酸亚铁溶液，一定量的样品溶液，0.125mL的0.6％的H₂O₂溶液，以蒸馏水补充体积至5.0mL，37℃保温反应60min，在510nm处测定吸光度值A。以上每加一次试剂均需混匀。既加样品溶液又加H₂O₂溶液的为样品管；只加H₂O₂溶液的为损伤管；未损伤管两者均不加。每份样品平行测定3次，取平均值计算表观羟自由基清除率S。计算公式如下：

Scavenging(％)＝[A(样品)-A(损伤)]/[A(未损伤)-A(损伤)]×100％

(3)实验结果

对北沙参提取物的羟自由基清除作用进行测定。结果表明，北沙参提取物(EC₅₀＝0.11mg/ml)显示出一定的抗氧化作用。

实施例5北沙参提取物对醋酸刺激所致小鼠扭体反应的影响

(1)实验方法

取体重18-20g雄性小鼠30只，均分三组，一组ig 100mg/Kg，另一组ig 50mg/Kg，对照组ig同体积生理盐水，1小时后腹腔注射0.3％醋酸0.2ml，观察15min内小鼠扭体次数。

(2)实验结果

北沙参提取物能抑制由醋酸引起的小鼠扭体次数，显示有镇痛作用。结果见表2。

表2北沙参提取物对对醋酸刺激所致小鼠扭体反应的影响[ x±S.E.M.(n＝10)]

组别

剂量(mg/kg)

扭体次数(30min)

生理盐水提取物I提取物II

--50100

35.3±9.128.8+8.621.7±7.5*

*与模型组比较p＜0.05

经常规急毒试验证明，北沙参提取物无毒性。

Claims (5)

1、具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物，其特征在于：该提取物是从中药北沙参中提取、分离和精制得到的，包含有木酯素苷、香豆素苷、以及苯丙素苷三类活性成分，还分离得到腺苷。

2、根据权利要求1所述的具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物，其特征在于：木酯素苷分别为glehlinoside A，glehlinoside B，(-)-secoisolariciresinol 4-O-β-D-glucopyranos-ide，(-)-secoisolariciresinol，glehlinoside C，橙皮素A(cirtrusinA)，以及(7R，8S)-dehydrodiconiferylalcohol 4，9-di-O-β-D-glucopyr-anoside；分别为东莨菪素(scopoletin)，蛇床子素(cnidilin)，(3’R)-hydroxymarmesin 4’-O-β-D-glucopyranoside，bergaptol5-O-β-D-gentiobioside，marmesinin，bergaptol-O-β-D-glucopyranoside，xanthotoxol8-O-β-D-glucopyranoside，以及4”-hydroxyimperatorin4”-O-β-D-glucopyranoside；分别为白花前胡苷(baihuaqianhuside)，丁香苷(syringin)，icariside D，2-(4′-hydroxyphenol)-glycol monotrans-ferulate，4-[β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyloxy]-3-methoxypropiophenone。

3、具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物，其特征在于：该提取物可作为有效成分，与药学上可接受的载体混合，按常规工艺制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或复方制剂。

4、具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物的制备方法，包括粉碎，经水煎煮或渗滤，醇沉，大孔吸附树脂吸附，用水洗去杂质，用醇液洗脱，其特征在于：由以下方法制备：

步骤1：北沙参粗粉加7-10倍量的水浸泡，加热回流提取，每次1-3小时，提取2-4次，合并各次提取液，减压浓缩至50℃时浓缩液相对密度为1.10-1.20。

步骤2：向步骤1所得的水提浓缩液中加入乙醇，至含醇量为60-90％，放置，滤过，合并滤液，减压回收溶剂至溶液所含生药的浓度为3-5g/ml。

步骤3：步骤所得溶液经大孔吸附树脂吸附，用稀醇(0-20％)洗去杂质，再用50-75％醇液洗脱得醇溶液，回收溶剂得到该提取物。

5、具有抗胃溃疡功能的北沙参提取物的用途，其特征在于：包含有木酯素苷、香豆素苷、以及苯丙素苷活性成分的北沙参提取物在制备抗胃溃疡疾病药物中的应用。